[发明专利]一种负载PRP的胰腺脱细胞支架及其制备方法

说明书

一种负载PRP的胰腺脱细胞支架及其制备方法，属于胰腺组织工程技术领域；胰腺脱细胞支架的脉管中组装富含多种促血管化生长因子的PRP并种植人脐静脉内皮细胞，负载的PRP被胰腺脱细胞支架的胶原纤维缓慢激活，在局部持续缓释大量的生长因子，为人脐静脉内皮细胞围绕支架内固有血管网络的粘附和增殖提供了理想环境；所述负载PRP的胰腺脱细胞支架仍然保留胰腺组织的天然结构、生物学特性及低免疫原性，其体内移植后局部持续缓释大量的生长因子能够起到明显的促血管化作用，操作方便、可控性好，有利于促进支架内新生血管的生成。

技术领域

本发明属于胰腺组织工程技术领域，具体是涉及一种负载PRP的胰腺脱细胞支架及其制备方法。

背景技术

作为全球疾病，每年有将近340万人死于糖尿病及其并发症。目前治疗1型糖尿病的有效方法是植入胰岛细胞，然而，胰岛的长期存活并不令人满意，移植到糖尿病动物中的胰岛细胞没有良好的定植环境，易于被身体清除，这降低了长期疗效。因此，目前关于胰腺组织工程支架的研究集中于重建胰岛的存活环境，最近提出的胰腺脱细胞支架(pancreatic decellularized scaffold，PDS)，它除去细胞成分，包括DNA和表面抗原，但保留细胞附着点、结构完整性和血管通道。胰腺脱细胞支架具有最适合于天然细胞生长的细胞外基质组分，提供了与移植细胞原有的生存环境类似的微环境。由于在移植后缺少足够的血供，脱细胞支架的使用依然受到了很大的限制。一个功能完善的人造组织工程器官必须具有完整的功能血管网络，基于细胞成分来构建新的血管是目前可行的血管化手段，胰腺脱细胞支架因具有完整的脉管网络及细胞外基质，成为了一个再造胰岛素分泌器官的可行性选择。

目前为解决脱细胞支架血管化的问题，研究人员通过偶联抗内皮细胞抗体来重建脱细胞支架内的血管网络(In Kap Ko等2014年)，或者通过明胶水凝胶修饰构建了再内皮化的脱细胞支架(Fanwei Meng等2018年)，但以上方法操作较为复杂，长期效果并不理想。

胰腺脱细胞支架采用专利号为ZL201410590216.8的方法制备。研究表明，脱细胞过程显著减少了肝素结合生长因子的数量，而这些肝素结合生长因子是组织工程血管化所必需的。因此，在胰腺脱细胞支架上补充促血管生成的生长因子对增强支架的血管化具有重要意义。富血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)是通过离心全血获得的血小板浓缩物，其在被活化后可释放大量生长因子，如血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子β1和β2(TGFβ1，β2)、血小板衍生生长因子(PDGF)和胰岛素样生长因子(IGF)，这些生长因子的浓度约为体内正常浓度的3～8倍。单独或联合应用这些生长因子均可刺激细胞增殖和分化，VEGF可促进新生血管的形成并抑制缺血组织中内皮细胞的凋亡，由于血管形成的复杂性，它还需要FGF、EGF、PDGF等的参与，并且自体PRP具有最佳的生长因子比例，可以最大化相互协同发挥作用，这反映了PRP促进血管生长的优势。

发明内容

本发明主要是解决上述现有技术所存在的问题，提供一种负载PRP的胰腺脱细胞支架及其制备方法。

本发明主要是通过下述技术方案解决现有技术所存在的问题：一种负载PRP的胰腺脱细胞支架，包括胰腺脱细胞支架，所述胰腺脱细胞支架来源于大鼠，所述胰腺脱细胞支架的脉管中组装富含多种促血管化生长因子的PRP，并种植人脐静脉内皮细胞，所述PRP与人脐静脉内皮细胞在胰腺脱细胞支架内形成负载PRP的胰腺脱细胞支架。

一种负载PRP的胰腺脱细胞支架的制备方法，其步骤为：

步骤1、PRP的制备：从大鼠心脏中将8ml全血收集到10ml无菌注射器中，然后放入装有3.2％柠檬酸钠作为抗凝剂的采血管中,通过变速离心机的初始离心以215g进行10min，将发白薄膜层上方的血浆置于第二个离心管中，然后再通过变速离心机以863g离心10min，弃去上清液，剩余的1ml带有血小板沉淀的部分为PRP；