[发明专利]耳念珠菌的实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物、TaqMan探针

权利要求书

1.一种用于PCR检测的引物组合物，其特征在于，包括：

正向引物，所述正向引物为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，

反向引物，所述反向引物为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

2.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1所述的引物组合物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括：探针，所述探针为SEQ IDNO：3所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的3’端标记有阻抑聚合酶延伸或扩增的基团，所述探针的5’端标记有荧光基团，所述探针的3’端标记有淬灭基团。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阻抑聚合酶延伸或扩增的基团为磷酸基团。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为HEX或FAM。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述淬灭基团为ECLIPSE或TAMRA。

8.根据权利要求2~7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述正向引物与所述反向引物的摩尔浓度比为1:1。

9.根据权利要求3~7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述探针与所述正向引物的摩尔浓度比为1:1。

10.权利要求1所述的引物组合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测耳念珠菌，所述检测包括如下步骤：

1）以待测样品DNA为模板，利用所述引物组合物对所述待测样品DNA进行PCR检测；

2）基于检测结果，确定待测样品中是否含有耳念珠菌。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述检测进一步包括：

步骤1）之前，预先将携带耳念珠菌rDNA基因的质粒作为标准品，以不同浓度的标准品作为模板，并利用所述引物组合物对所述标准品进行PCR检测；

步骤2）是通过如下方式进行的：

基于待测样品与所述标准品的检测结果，确定待测样品中耳念珠菌的浓度。

12.根据权利要求10~11任一项所述的用途，其特征在于，所述待测样品DNA来源于包括选自分离的菌体，痰、肺泡灌洗液，血液和咽拭子的至少之一。

13.根据权利要求10~11任一项所述的用途，其特征在于，所述PCR检测条件为：首先95℃ 30s；然后95℃ 5s，58℃ 30s，共40个循环。