[发明专利]一种基质素2的ELISA试剂诊断盒及其使用方法

权利要求书

1.一种基质素2的ELISA试剂诊断盒，包括盒体和与所述盒体连接的盒盖，其特征在于，所述盒体内设有标准品、标准品稀释液、酶标试剂、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液和浓缩洗涤液；

所述试剂诊断盒还包括ELISA酶标板和封板膜；

所述标准品包括缓冲液20~300mM、基质素2抗原、稳定剂10~30g/L、防腐剂4~8g/L、抗氧化剂0.1~2g/L；

所述酶标试剂包括缓冲液20~300mM，基质素2多肽抗体10~300ng/L，稳定剂10~30g/L，电解质10~30g/L，防腐剂4~8g/L，pH为6~9；

基质素2多肽抗体采用以氨基酸序列作为抗原选择部分，采用抗体制备标准方法合成、分离纯化得到的IgG抗体，该氨基酸序列如下：ALEDSGGRQDSAAWDLPQQAHQPTEPEPVTIKIKDLLSCSNFAVQHRFLFEEDNLSRST QKLFHSTKSSGNPLEE；

所述显色剂A液包括醋酸钠2.72wt％、柠檬酸0.32wt％、双氧水0.02wt％，余量为蒸馏水；

所述显色剂B液包括乙二胺四乙酸二钠0.04wt％、柠檬酸0.19wt％、甘油9wt％、TMB0.03wt％，余量为蒸馏水；

所述标准品稀释液和样品稀释液均包括缓冲液200~400mM，表面活性剂10~30g/L，稳定剂2~6g/L，电解质10~30g/L，高分子促进剂10~40g/L，防腐剂1~3g/L，pH为6~9；

所述缓冲液为醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、甘氨酸缓冲液、CAPSO、MOPS、Hepes缓冲液中的一种；

所述表面活性剂选自Triton系列、Tween系列、月桂醚中的一种；

所述稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖中的一种；

所述电解质选自氯化钠、氯化钾中的一种；

所述高分子促进剂选自聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠中的一种；

所述防腐剂选自对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯中的一种；

所述抗氧化剂选自没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、甘草抗氧化物、维生素系列中的一种。

2.一种如权利要求1所述的基质素2的ELISA试剂诊断盒的非诊断目的的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

对待检测样本进行处理；

将标准品依照浓度梯度加入到酶标板的标准品孔内；

将标准品依照浓度梯度加入到酶标板的空白对照孔内；

将待检测样本依照浓度梯度加入到酶标板的待测样品孔内；

利用封板膜封板后温育；

配制洗涤液洗涤；

标准品孔、待测样品孔内加入酶标试剂；

每孔先参加显色剂A液，再加显色剂B液，显色；

加停止液，停止反应；

测定结果。

3.如权利要求2所述的一种基质素2的ELISA试剂诊断盒的非诊断目的的使用方法，其特征在于，待检测样本处理方法包括：

血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，再次离心；

血浆：根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，再次离心；

尿液：用无菌管收集，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，再次离心；

细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清；检测细胞内的成份时，用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml，通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，再次离心；

组织标本：切割标本后，称取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷冻保存备用，标本融化后仍然保持2-8℃的温度，加入PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟，转速为2000-3000转/分，仔细收集上清，分装后一份待检测，其余冷冻备用。

4.如权利要求2所述的一种基质素2的ELISA试剂诊断盒的非诊断目的的使用方法，其特征在于，试剂盒的使用步骤为：ELISA试剂盒在酶标板上设标准品孔10孔，在榜首、第二孔中分别加标准品100μl，然后在榜首、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从榜首孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，ELISA试剂盒混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九、第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九、第十孔中各取50μl弃掉；稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为30ng/L，20ng/L，10ng/L，5ng/L，2.5ng/L；

加样：分别设空白孔、待测样品孔，在酶标板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，ELISA试剂盒然后再加待测样品10μl，加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，晃动混匀；

温育：ELISA试剂盒用封板膜封板后置37℃温育30分钟；

配液：将20倍浓缩洗刷液用蒸馏水20倍稀释后备用；

洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干；

加酶：每孔参加酶标试剂50μl，空白孔除外；

显色：每孔先参加显色剂A液50μl，再参加显色剂B液50μl，震动混匀，37℃避光显色15分钟；

停止：每孔加停止液50μl，停止反响，此刻蓝色立转黄色；

ELISA试剂盒测定：调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度，所述测定在加停止液后15分钟以内进行。