[发明专利]一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于依次包括以下步骤：

（1）琴叶榕茎段的消毒取琴叶榕的当年生茎段，放入适量的洗洁精溶液浸泡2分钟，用流水冲洗0.5小时后，沥干后放入冰箱4℃低温冷藏24-48小时，取出后在超净台浸入滴加有1滴吐温-80，质量分数为0.1%的升汞溶液内浸泡消毒10-12分钟，然后用无菌水充分浸洗3次，于无菌滤纸上切去头尾并切成带一腋芽的茎段，转入过滤灭菌的0.1克/升半胱氨酸溶液中浸泡10-60分钟，用无菌水充分浸洗3次后得到消毒完的外植体材料；

（2）丛生芽的诱导

将上一步得到的外植体材料按生长极性接种到WPM培养基中培养，该培养基中添加有0.4毫克/升的ZT、2.0毫克/升的6-BA、0.5克/升的CH、1.0克/升的PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0；接好外植体的培养基置先于黑暗中培养1天，培养温度为21-25℃；随后转入光照培养，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14 小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

（3）不定芽的增殖

将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3个不定芽的芽块，接种到WPM培养基中进行培养，该培养基添加有0.1 毫克/升的NAA、1.0 毫克/升的6-BA、0.5克/升的CH、1.0克/升的PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

（4）再生植株的生根培养

切取叶片嫩绿、生长旺盛且叶片3-4枚的不定芽，插入50%浓度的WPM培养基中生根培养，该培养基添加有0.2 毫克/升的NAA、2.0克/升的AC、20-30克/升的蔗糖， 8.0克/升的琼脂，pH 值为5.8-6.0，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

（5）炼苗移栽

待生根的组培苗的苗高长3厘米以上，当根长超过5 厘米时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量无菌水以防止培养基干裂，于6小时后半挪开瓶盖，并添加无菌水，再过18 小时，移走瓶盖，让30-40 微摩尔/米²·秒光强的灯光直照再生植株培养2天，期间加无菌水若干次，然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用流水小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于曾消毒过的加入蛭石的菜园土中，株距2厘米以上，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在18-22℃，3 天后揭开聚乙烯塑料薄膜四角，次日将聚乙烯塑料薄膜全部揭开，待新叶展开后即可带土移栽至大田。

2.根据权利要求1所述的一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（1）中茎段经清洗后于冰箱4℃低温冷藏24小时，并在升汞溶液消毒并清洗后再浸于0.1克/升半胱氨酸溶液中浸泡10分钟。

3.根据权利要求1所述的一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的WPM培养基添加有0.4毫克/升的ZT、2.0毫克/升的6-BA、0.5克/升的CH、1.0克/升的PVP。

4.根据权利要求1所述的一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（3）中WPM培养基添加有0.1毫克/升的NAA、1.0毫克/升的6-BA、0.5克/升的CH、1.0克/升的PVP。

5.根据权利要求1所述的一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的生根培养的培养基浓度为50%的WPM添加有0.2毫克/升的NAA、2.0克/升的AC。

6.根据权利要求1所述的一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（5）中消毒菜园土中添加的蛭石体积占比为1：20。