[发明专利]一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：（1）琴叶榕茎段的消毒和接种：取当年抽出的琴叶榕新茎，剪成带腋芽茎段进行接种；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽。在上述步骤中采用了不同处理、不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法，能够快速地获得琴叶榕植株，利于产业化生产。采用本发明方法，琴叶榕丛生芽的不定芽诱导率高达80.0%，不定芽数6.6，不定芽增殖倍数可达6.4，生根率达97.5%，植株移栽成活率可达98%以上。

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法。

背景技术

琴叶榕(Ficus pandurata Hance)，又名鸡公木、筛箕子木、牛奶柴、水榕、牛奶树、小牛奶树、倒吊葫芦，因其叶形状似西洋乐器的提琴而得名，为桑科榕属小灌木，产广东、海南、广西、福建、湖南、湖北、江西、安徽(南部)、浙江。生于山地、旷野或灌丛林下。其根和叶入药，名琴叶榕，又名山甘草、山沉香、过山香、铁牛入石、牛根子。其性平，味甘、微辛，具祛风除湿、解毒消肿、活血通经。主治风湿痹痛、黄疸、疟疾、百山咳、乳汁不通、乳痈、痛经、痛经、痈疖肿痛、跌打损伤和毒蛇咬伤。目前琴叶榕基本处于野生状态，而野生状态的琴叶榕呈零星状分布，说明其靠种子繁殖的效率并不高。目前尚无琴叶榕快速繁殖的研究报道。申请号为CN201310534804.5的专利和两篇发表的学术论文所用的材料琴叶榕实际上均为国外引进的大琴榕(Ficus lyrata)。

目前榕属植物的组织培养与快速繁殖的研究报道多集中于橡皮树、菩提树、富贵榕、大琴榕等园艺用植物和无花果等果树上，所用外植体多为茎段、茎尖和叶片，但不定芽的诱导率和增殖率普遍不高，且实验所用的基本培养基普遍使用高离子浓度的MS。桑科植物尤其是榕属植物，茎和叶中分布大量的乳汁管，乳汁管里乳汁含有大量多酚类物质，在受伤或离体培养时，很易流出在空气中氧化成褐色的醌类物质，导致培养基的褐变，从而影响了组织培养的顺利进行。而如何防止褐变在文献里基本无涉及。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种成活率高，利于实现产业化生产的琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法。

为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：一种琴叶榕组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：

(1)琴叶榕茎段的消毒

取琴叶榕的当年生茎段，放入适量的洗洁精溶液浸泡2分钟，用流水冲洗0.5-1.0小时后，沥干后放入冰箱4℃低温冷藏0-48小时，取出后在超净台浸入滴加有1滴吐温-80，质量分数为0.1％的升汞溶液内浸泡消毒10-12分钟，然后用无菌水充分浸洗3次，于无菌滤纸上切去头尾并切成带一腋芽的茎段，转入过滤灭菌的0.1克/升半胱氨酸溶液中浸泡0-60分钟，用无菌水充分浸洗3次后得到消毒完的外植体材料；

(2)丛生芽的诱导

将上一步得到的外植体材料按生长极性接种到WPM培养基中培养，该培养基添加不超过2.0毫克/升的ZT、不超过5.0毫克/升的6-BA、不超过1.0克/升的CH、不超过5.0克/升的PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0；接好外植体的培养基置先于黑暗中培养1天，培养温度为21-25℃；随后转入光照培养，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

(3)不定芽的增殖

将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3个不定芽的芽块，接种到WPM培养基中进行培养，该培养基添加有不超过1.0毫克/升的NAA、不超过5.0毫克/升的6-BA、不超过1.0毫克/升的CH、不超过5.0克/升的PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；