[发明专利]一种猪α-干扰素的后提取工艺

权利要求书

1.一种猪α-干扰素的后提取工艺，其特征在于，包括步骤：

S1.将含有猪α-干扰素的发酵液离心，弃菌体，保留上清液；

S2.将上清液先通过50KDa分子量陶瓷膜过滤，收集滤出液；再将所述滤出液通过10KDa分子量陶瓷膜过滤，收集截留液；

S3.向步骤S2的截留液中加入等体积的Ni²⁺-IDA-葡聚糖载体和NaCl溶液，进行吸附反应，得到反应液；

S4.向步骤S3的反应液中加入等体积的磷酸盐缓冲液，混匀后通过50KDa分子量陶瓷膜过滤，收集截留液；

S5.向步骤S4的截留液中加入洗脱液，对猪α-干扰素进行洗脱，然后通过30KDa分子量陶瓷膜过滤，收集滤出液；

S6.将步骤S5的滤出液通过10KDa分子量陶瓷膜过滤脱盐，收集截留液，即得猪α-干扰素原液。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤S2中，所述通过50KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.2MPa，上清液流速为1m³/h；所述通过10KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.25MPa，滤出液流速为1.2m³/h。

3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤S3中，加入等体积的4mg/mL Ni²⁺-IDA-葡聚糖载体，加入NaCl溶液使反应体系中的NaCl终浓度为0.9mol/L，调节pH值为8.0，30℃恒温水浴，以500rpm/min的速度搅拌反应30min，得到反应液。

4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤S4中，所述磷酸盐缓冲液含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/LNa₂HPO₄、0.3mol/L NaCl，pH 8.0；所述通过50KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.2MPa，滤出液流速为1m³/h。

5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤S5中，依次用洗脱液A、B、C、D、E对截留液中吸附在所述Ni²⁺-IDA-葡聚糖载体上的猪α-干扰素进行洗脱，分别收集各洗脱步骤的滤出液，其中：

洗脱液A含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/L Na₂HPO₄、0.3mol/L NaCl、0.02mol/L咪唑，pH 8.0；

洗脱液B含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/L Na₂HPO₄、0.3mol/L NaCl、0.1mol/L咪唑，pH 8.0；

洗脱液C含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/L Na₂HPO₄、0.3mol/L NaCl、0.15mol/L咪唑，pH 8.0；

洗脱液D含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/L Na₂HPO₄、0.3mol/L NaCl、0.2mol/L咪唑，pH 8.0；

洗脱液E含有2.7mmol/L NaH₂PO₄、47.3mmol/L Na₂HPO₄、0.3mol/L NaCl、0.3mol/L咪唑，pH 8.0。

6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤S5中，所述通过30KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.2MPa，滤出液流速为1m³/h。