[发明专利]鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种鸡细小病毒和H9亚型禽流感病毒的二重PCR检测引物组，包括引物H9-F、引物H9-R、引物ChPV-F和引物ChPV-R；

引物H9-F的序列如SEQ ID NO.1所示，引物H9-R的序列如SEQ ID NO.2所示，引物ChPV-F的序列如SEQ ID NO.3所示，引物ChPV-R的序列如SEQ ID NO.4所示。

2.含有权利要求1所述的引物组的试剂或试剂盒。

3.使用二重PCR检测鸡细小病毒和H9亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，二重PCR所用的引物为权利要求1所述的引物组。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的cDNA和DNA作为模板；

(2)建立二重PCR反应体系，利用上述引物组进行二重PCR反应；

(3)将PCR反应产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，当样品扩增出558bp的条带时说明该样品有鸡细小病毒，当样品扩增出367bp条带时说明该样品有H9亚型禽流感病毒。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中PCR反应体系为：2×PCR Mix12.5μL，待测样品cDNA和DNA混合物模板2μL，引物H9-F和H9-R各加入0.5μL，引物ChPV-F和ChPV-R则分别加入0.8μL，最后用超纯水补足至25μL。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中二重PCR反应条件为：95℃5min；进入95℃30s，56℃30s，72℃45s，共35个循环；然后再72℃延伸10min。

7.权利要求1所述的引物组或含有该引物组的试剂盒在检测检测鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒中的应用。