[发明专利]一种石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法在审
| 申请号： | 201911062265.3 | 申请日： | 2019-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN110656079A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 高品;于冬冬;唐正;张漓杉;钟山;钱雅洁 | 申请（专利权）人： | 东华大学;桂林电子科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12N1/02;C12N1/20;B09C1/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 31001 上海申汇专利代理有限公司 | 代理人： | 徐俊 |
| 地址： | 201600 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 石油烃污染土壤 修复 富集培养 恒温振荡 降解菌剂 培养菌液 培养基 无机盐培养基 对数生长期 富集培养基 工程化应用 恒温培养箱 无二次污染 过程实现 降解菌株 菌液接种 冷冻保存 平板涂布 筛选分离 生理盐水 生物强化 梯度稀释 梯度压力 驯化培养 甘油 降解率 菌落 称取 菌液 制备 接种 筛选 | ||
1.一种石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：将石油烃污染土壤于LB培养基中培养，以活化土著微生物获得培养菌液；
步骤2)：将活化后的培养菌液接种到无机盐培养基中，置于恒温摇床中振荡培养，利用梯度压力筛选法进行驯化培养，培养后按梯度稀释加入生理盐水，将其平板涂布，置于恒温培养箱中培养；培养结束后，挑取尺寸均一且完整的菌落于固体培养基中进行富集培养；
步骤3)：将富集培养后的菌液接种至LB培养基中，置于恒温摇床中振荡培养至对数生长期，加入甘油混合后冷冻保存，即得萘修复降解菌剂。
2.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中石油烃污染土壤与LB培养基的比例为1g:(8～12)L，LB培养基的浓度为20～30g/L，培养的时间为24h。
3.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中活化后的培养菌液的接种量为5wt％；恒温摇床的温度为37℃，振荡速率为100～200r/min，振荡时间为4～7d；恒温培养箱的温度为37℃，培养时间为2-5d。
4.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中无机盐培养基含有1g/L Na2HPO4、0.75g/L KH2PO4、0.5g/L NH4Cl、0.1g/LMgSO4·7H2O、0.01g/L CaCl2、0.5g/L NaNO3、0.03g/L FeSO4·7H2O及0.005L/L微量元素溶液，其pH值为7.0-7.2；其中，微量元素溶液含有5g/L CuCl2·2H2O、1g/L ZnCl2、0.5g/LCoCl2·6H2O及0.06g/L H3BO3。
5.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中梯度压力筛选萘浓度为5～50mg/L，梯度稀释中培养菌液与生理盐水的体积比为10-6～10-1。
6.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的固体培养基为含有琼脂的无机盐培养基，其中，琼脂的质量百分比为1.5％～5％。
7.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中甘油与培养菌液的体积比为1:(0.6～0.8)。
8.如权利要求1所述的石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中菌液的接种量为5wt％。
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