[发明专利]一种利用培养基进行胚胎质量的检测方法

说明书

本发明属于蛋白检测领域，具体涉及一种培养基及利用其培养基进行胚胎质量的评估方法。所述培养基，包括胎牛血清蛋白、胰岛素‑转铁蛋白‑硒添加剂和嘌呤霉素。本发明利用培养基进行胚胎质量的评估方法,依次通过胚胎培养与胚胎条件培养液的收集、解冻胚胎条件培养液、培养子宫内膜基质细胞、添加胚胎条件培养液和蛋白检测，得到具体的细胞分泌蛋白的差异蛋白，从而对胚胎质量进行评估。本发明的评估方法十分的有效和准确，弥补了市面上的空白。

技术领域

本发明属于蛋白检测领域，具体的涉及一种培养基及利用其培养基进行胚胎质量的评估方法。

背景技术

胚胎条件培养液简称BCM，是一种含有胚胎的培养液。体外受精－胚胎移植( invitro fertilization and embryo transfer， IVF-ET) 是目前治疗不孕症最好的方法。胚胎现有的评估方法主要根据细胞数目，碎片和均匀度等形态学参数进行胚胎评分，但在实际操作过程中发现，该方法进行胚胎评级时受人为主观因素影响较大，经常存在着评分不一致的现象。而为进一步提高成功率和降低多胎妊娠率，需采用一种更为科学的方法鉴别胚胎质量，以便在保证一定妊娠率的情况下减少移植胚胎的数量和次数。胚胎作为一种有分泌活性的生物体，大量的研究表明，种植前的胚胎能够分泌不同的配体分子，配体分子包括生长因子，细胞因子和激素类分子等。而有相关学者发现了胚胎的分泌活性与其种植潜能可能具有相关性。

但由于BCM中外加蛋白的含量往往显著高于胚胎自身分泌的蛋白数量，目前直接定量检测如质谱法和酶联免疫法等对BCM进行检测也无法检出明确的胚胎源性信号分子或仅能实现部分信源分子的检出。所以检测BCM中的胚胎信号分子难度较大，直接对BCM中胚胎分泌信号分子检测无法取得良好的成果。而子宫内膜基质细胞又称HESC作为胚胎植入重要的接受环境，在自然生理过程中，卵子或精子均不能单独引起子宫内膜的变化，只有在精卵结合并发育成胚胎，才能启动子宫内膜一系列的形态及分子响应，为胚胎种植做准备。这提示胚胎信号可以作为植入发生的起始信号，可能扮演着“导火索”的角色，主要功能并不是直接的效应作用，而是作用于母体子宫内膜，引起生物信号由“点”“线”“面”到“体”的全面响应。而且这种响应可能与BCM对应胚胎的质量及种植潜能密切相关。而现有技术中缺少一种利用BCM进行胚胎的质量评估的方法。

发明内容

本发明为了解决上述背景技术中缺少一种利用BCM进行胚胎的质量评估的方法的技术问题，提供能够有效进行胚胎质量评估的一种培养基及利用其培养基进行胚胎质量的评估方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种培养基，包括胎牛血清蛋白、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂和嘌呤霉素，所述胎牛血清蛋白、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂和嘌呤霉素的质量比为1979:20:1。

本发明的有益效果是：上述培养基的营养成份能够很好的用于胚胎条件培养液的培养。胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂采用赛默飞官网订购的41400045型号的Insulin,Transferrin,Selenium Solution(ITS -G),100X。胎牛血清蛋白采购来自上海信帆生物科技有限公司。上述培养基的制备方法为：取10g的Sigma-Aldrich中国官网上购买的Sigma，D2906-1L型粉末，补充1.5g 碳酸氢钠，溶于纯净水后过滤取滤液，然后向滤液中添加1%浓度的胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂和嘌呤霉素配置为培养基。添加10%浓度的胎牛血清蛋白及1%浓度的青链霉素配置为完全培养基即所需要的培养基。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述胎牛血清蛋白的浓度为10%g/dl，所述胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂的浓度为1%g/dl，所述嘌呤霉素的浓度为500ng/mL。

采用上述进一步方案的有益效果是，确定的浓度能够让得到的培养基效果更好。

本发明还提供一种利用上述所述的培养基进行胚胎质量的评估方法，包括以下步骤：