[发明专利]乌拉立肽的制备方法

说明书

本发明提供了一种制备高纯度乌拉立肽方法，方法中采用了特殊的保护氨基酸片段：Boc‑Thr(tBu)‑Ala‑Pro‑Arg(Pbf)‑Ser(tBu)‑Leu‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Cys(Trt)‑Phe‑Gly‑OH，缩短了制备工艺周期，提高了规模化制备中产品的纯度和收率。

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及乌拉立肽的制备方法。

背景技术

乌拉立肽是存在于血浆及尿液中的内源性利钠肽家族成员之一，该家族包括ANP、BNP、CNP、DNP、血管扩张因子及乌拉立肽。ANP、BNP与乌拉立肽能够通过心房利钠肽受体(NPRA)发挥生理及药理作用，激活鸟苷酸环化酶，增加环鸟苷磷酸(cGMP)水平，触发RAAS系统抑制、血管舒张、纤维化及变松效应(lusitropy)。ANP、BNP及CNP能够与心房利钠肽受体3(NPR-C)结合，实现对血浆中乌拉立肽水平的控制。心脏、肾脏、血管平滑肌细胞及其他器官均有表达NPR-A受体，肾脏远端小管能够合成乌拉立肽，以应对血清钠浓度的升高。乌拉立肽能够在内髓集合管与NPR-A受体结合并发挥生理作用。乌拉立肽与水钠重吸收抑制、尿液及钠排泄增加、肾小球前血管舒张、肾小球后血管舒张及肾小球滤过率维持有关。临床研究证据显示，乌拉立肽能够作用于肾脏、心脏与血管。因为乌拉立肽与奈西立肽的受体作用途径相同，所以乌拉立肽可能无法带来更好的临床预后，然而，更早针对有害病理机制进行治疗可能转化为良好的长期预后。

乌拉立肽具有以下的结构：

Thr-Ala-Pro-Arg-Ser⁵-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser¹⁰-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg¹⁵-Met-Asp-Arg-Ile-Gly²⁰-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu²⁵-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe³⁰-Arg-Tyr-OH，Cyelic(11，17)-Disulfide

乌拉立肽的制备方法已有很多报道，本发明提供一种高效的乌拉立肽制备方法来制备高纯的产品，以满足医药用途。

发明内容

本发明提供了一种新的高效制备方法，采用Fmoc-Tyr(tBu)树脂为起始树脂，用了特殊的保护氨基酸片段，缩短了制备工艺周期，提高了了规模化制备方法中产品纯度和收率。

本发明提供的乌拉立肽的制备方法，包括：采用Fmoc-Tyr(tBu)树脂为起始树脂，用固相多肽合成法制备，经过多肽固相合成法得到乌拉立肽肽树脂，乌拉立肽肽树脂再经酸解得到乌拉立肽线性肽粗品，再经碘氧化工艺环化，最后经过纯化和冻干，得到乌拉立肽纯品。

其中乌拉立肽多树脂的合成过程中除了使用其他常规的保护氨基酸，同时使用了以下特殊保护氨基酸片段：

Boc-Thr(tBu)-Ala-Pro-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH。

乌拉立肽树脂为：

Boe-Thr(tBu)-Ala-Pro-Arg(Pbf)-Ser(tBu)⁵-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)¹⁰-Cys(Trt)-Phe-Gly-Gly-Arg(Pbf)¹⁵-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly²⁰-Ala-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Leu²⁵-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe³⁰-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-树脂