[发明专利]一种金属硫蛋白融合蛋白构建、固定化载体快速制备及其在重金属离子去除中的应用

权利要求书

1.一种基因工程金属硫蛋白融合蛋白，其特征在于，将金属硫蛋白编码基因mt、碳水化合物结合结构域编码基因cbm以及超折叠绿色荧光蛋白的编码基因sfGFP融合在一起，通过转化至大肠杆菌内，表达得到金属硫蛋白融合蛋白MT-CBM-sfGFP或sfGFP-CBM-MT；

所述金属硫蛋白融合蛋白MT-CBM-sfGFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；金属硫蛋白融合蛋白sfGFP-CBM-MT的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码MT-CBM-sfGFP融合蛋白的基因碱基序列如SEQ ID NO.3所示；编码sfGFP-CBM-MT融合蛋白的基因碱基序列如SEQID NO.4所示。

2.一种表达如权利要求1所述的金属硫蛋白融合蛋白的菌株，其特征在于，所述菌株中包含mt-cbm-sfGFP基因或sfGFP-cbm-mt基因。

3.一种如权利要求1所述基因工程金属硫蛋白融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将金属硫蛋白编码基因mt、碳水化合物结合结构域编码基因cbm以及超折叠绿色荧光蛋白的编码基因sfGFP融合在一起，获得融合基因mt-cbm-sfGFP或sfGFP-cbm-mt，将基因序列连接至pET22b（+）表达载体上构建得到重组质粒重组质粒pET22b-mt-cbm-sfGFP或pET22b-sfGFP-cbm-mt，转化至菌株Escherichia coli BL21内获得BL21/ mt-cbm-sfGFP菌株或BL21/ sfGFP-cbm-mt菌株；

（2）取步骤（1）制备得到的菌株分别接种于5 mL，含终浓度100 µg/mL的氨苄青霉素的LB培养液中，37℃培养过夜；再将培养好的菌液按1%v/v分别接种于200 mL，含终浓度100 µg/mL的氨苄青霉素的LB液体培养基中, 37℃振荡培养2~3 h ，OD₆₀₀达到0.5后加入终浓度0.5 mmol/L的诱导剂IPTG，25℃ 180 rpm震荡培养16 h；12000 rpm离心5 min，收集菌体；

（3）将离心获得的菌体用50mM，pH7.6的Tris-HCl缓冲溶液悬浮并进行超声波破碎，然后再在12000 rpm离心5 min，收集上清即为融合蛋白。

4.一种如权利要求1所述的金属硫蛋白融合蛋白的固定化方法，其特征在于，将金属硫蛋白融合蛋白与微晶纤维素进行吸附结合，获得带有金属硫蛋白融合蛋白的纤维素。

5.一种如权利要求1所述的金属硫蛋白融合蛋白在去除中药水煎液、液体食品、废水中重金属离子中的应用。