[发明专利]一种转基因玉米核雄性不育保持系及应用

权利要求书

1.一种转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于所述保持系是将外源T-DNA载体导入玉米基因组构建而成，导入的外源T-DNA中除了雄性核不育的育性恢复基因以外，还包含如下3种功能片段中至少2个功能片段：1)在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框；2)一种可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段；3)一种可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2表达的DNA片段。

2.如权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于外源T-DNA中除了雄性核不育的育性恢复基因以外，还包含如下2个DNA功能片段：1)在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框；2)一种可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段。

3.如权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于外源T-DNA中除了雄性核不育的育性恢复基因以外，还包含至少如下2个DNA功能片段：1)在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框；2)一种可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2的DNA片段。

4.如权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于外源T-DNA中除了雄性核不育的育性恢复基因以外，还包含至少如下2个DNA功能片段：1)一种可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段；2)一种可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2的DNA片段。

5.如权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于雄性核不育的育性恢复基因核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示，在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示；所述可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段核苷酸序列为SEQ ID NO.10所示；所述可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2表达的DNA片段核苷酸序列为SEQ ID NO.6所示。

6.如权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于所述保持系还包含选择标记表达框和/或在花粉中表达的α-淀粉酶的表达框，所述选择标记表达框为草铵膦耐受基因表达框。

7.如权利要求6所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于在花粉中表达的α-淀粉酶的表达框核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述草铵膦耐受基因的核苷酸序列如SEQID No.7示。

8.如权利要求6所述转基因玉米核雄性不育保持系，其特征在于外源T-DNA载体由下列之一表达框构成：(1)抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段、草铵膦耐受基因表达框、雄性核不育的育性恢复基因表达框、在花粉中表达的α-淀粉酶的表达框、在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框；(2)抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段、草铵膦耐受基因表达框、雄性核不育的育性恢复基因表达框、在花粉中表达的α-淀粉酶的表达框、抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2表达的DNA片段；(3)雄性核不育的育性恢复基因表达框、在花粉中表达的α-淀粉酶的表达框、在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框、抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2表达的DNA片段、草铵膦耐受基因表达框。

9.一种含权利要求1或6所述转基因玉米核雄性不育保持系中T-DNA载体的植物细胞。

10.一种权利要求1所述转基因玉米核雄性不育保持系在制备非转基因核不育种子中的应用，其特征在于所述应用的方法为：将转基因玉米核雄性不育保持系与纯合隐性不育系间隔种植，通过下列方法之一筛选非转基因核不育种子：(1)当保持系T-DNA载体包含在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框和可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段时，首先利用荧光识别方法去除荧光种子，然后在出苗以后喷洒烟磺隆和/或苯达松进一步杀灭仍然混杂的转基因苗；(2)当保持系T-DNA载体包含在种子胚乳中表达一种荧光蛋白质的表达框和可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2的DNA片段时，同时采用荧光和籽粒显著小的特征清除转基因种子；(3)当保持系T-DNA载体包含可以抑制玉米抗除草剂基因CYP81A9表达的DNA片段和可以抑制玉米胚乳特异表达的细胞壁转化酶InCW2的DNA片段时，首先清除籽粒显著小的种子，然后在出苗以后喷洒烟磺隆和/或苯达松进一步杀灭仍然混杂的转基因苗。