[发明专利]一种同时检测血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法，先对血浆样品预处理，再采用高效液相色谱串联质谱进行定量测定，利用内标法定量，同时对血浆中三种药物的浓度进行分析测定。该方法灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点，适用于同时分析血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的量。

技术领域

本发明属于医药中的药物分析检测技术，特别是涉及一种同时检测血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法。

背景技术

拉米夫定和富马酸替诺福韦二吡呋酯均为核苷类逆转录酶抑制剂(Nucleosidereverse transcriptase inhibitors,NRTIs)，拉米夫定对乙型肝炎病毒(HBV)和人免疫缺陷病毒(HIV)有较强的抑制作用，富马酸替诺福韦二吡呋酯(Tenofovir dsoproxilfumarate)是替诺福韦的前药，口服给药后富马酸替诺福韦二吡呋酯在胃肠道迅速吸收，随后经酯酶水解成单酯中间体和活性成分替诺福韦，从而发挥药理活性。ACC007为非核苷类逆转录酶抑制剂(Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI)，由江苏艾迪药业股份有限公司开发，具有优良的抗HIV病毒活性和很好的安全性。3种药物的化学结构式如图1所示。ACC007和拉米夫定、富马酸替诺福韦二吡呋酯三个药物联合使用，以“鸡尾酒疗法”用于治疗HIV感染。建立一种在血浆中同时检测ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法，就不必采用针对三种药物的不同检测方法，这样有助于加快检测时间，减少检测溶剂的使用，具有节能环保的效果。

发明内容

发明目的：针对上述现有技术，本发明提供了一种利用高效液相色谱串联质谱技术，能够实现灵敏度高、重复性好、准确度高的同时检测血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法。

技术方案：本发明所述的一种同时检测血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法，其采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以ACC007、拉米夫定、替诺福韦标准样品的浓度为X轴，以标准样品与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将ACC007、拉米夫定和替诺福韦与内标峰面积的比值代入标准曲线，计算得到ACC007、拉米夫定和替诺福韦的浓度；具体色谱-质谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；

流动相A：10nM醋酸铵含0.1％甲酸；

流动相B：甲醇；

柱温：40℃；

流速：0.4mL/min；

采用梯度洗脱方式，梯度见表1：

表1流动相梯度表

(2)质谱条件：

采用电喷雾电离源(ESI)，正离子扫描(高灵敏度模式)方式检测，GAS1：55psi，GAS2：55psi，Curtain GAS：30psi，源温度为450℃，多离子反应检测(MRM)，具体的离子信息见表2：

表2质谱监测的参数

所述血浆为人或动物的血浆。

本发明中，以甲苯磺丁脲为内标，所述内标工作溶液为含甲苯磺丁脲的甲醇。

所述血浆样品预处理方法如下：取血浆25μL，加入100μL含内标甲苯磺丁脲500nM的甲醇，涡流1min后沉淀蛋白，13000rpm离心10min后，定量吸取20μL上清液加入80μL去离子水，涡流1min即得。