[发明专利]一种刺激响应的靶向聚多糖超分子诊疗组装体及其制备方法

权利要求书

1.一种刺激响应的靶向聚多糖超分子诊疗组装体，其构筑单元为环糊精修饰透明质酸和二硫键连接的金刚烷萘酰亚胺喜树碱前药，通过环糊精和金刚烷之间的主客体相互作用构筑形成以亲水的透明质酸为外壳、疏水的喜树碱为内核的组装体，组装体形貌为球形的纳米粒子，粒径为260-280nm，并对硫醇具有很好的药物释放响应性；其中环糊精修饰透明质酸分子式为(C₁₄H₂₁NO₁₁)₁₁₇₅(C₅₈H₉₅N₃O₄₄)₁₉₆，平均每7个透明质酸单元修饰有一个环糊精单元，二硫键连接的金刚烷萘酰亚胺喜树碱前药的分子式为C₄₄H₅₂Cl₂N₄O₇S₂，该组装体构筑单元的结构如下：

2.一种权利要求1所述刺激响应的靶向聚多糖超分子诊疗组装体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将分子量为550kDa的透明质酸钠溶于pH为7.2，浓度1mM的磷酸缓冲溶液中，再加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，搅拌反应30min，得到溶液A；

2)将6-去氧-6-乙二胺-β-环糊精溶于pH为7.2，浓度1mM的磷酸缓冲溶液中，加入到步骤1)得到的溶液A中，在室温下搅拌24h，然后装入截留分子量范围为8-14kDa的透析袋中用过量的蒸馏水连续透析5天，将所得溶液冻干制得环糊精修饰透明质酸(HACD)；

3)将4-硝基-N-2-氨乙基-1,8-萘酰亚胺溶于无水二氯甲烷中，向溶液中加入三乙醇胺，在冰浴条件下搅拌30min得到混合液B；将金刚烷甲酰氯溶于二氯甲烷中，然后逐滴加入到上述混合溶液B中，反应液在室温下搅拌12h；将反应液用水萃取，收集有机相并用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂得金刚烷修饰萘酰亚胺中间体1的粗品，然后以正己烷与乙酸乙酯的混合液为展开剂，用200-300目硅胶柱进行分离制得金刚烷修饰萘酰亚胺中间体1；

4)将步骤3)制备的金刚烷修饰萘酰亚胺中间体1溶于乙醇中，加入催化量的钯碳，加入水合肼，反应液回流搅拌12h；将反应液冷却到室温，过滤除去钯碳，收集滤液，减压蒸馏除去溶剂得金刚烷修饰萘酰亚胺中间体2的粗品，然后以正己烷与乙酸乙酯的混合液为展开剂，用200-300目硅胶柱进行分离制得金刚烷修饰萘酰亚胺中间体2；

5)将步骤4)制备的金刚烷修饰萘酰亚胺中间体2、N,N-二异丙基乙胺溶于无水甲苯中，将溶液逐滴加入到溶有三光气的甲苯溶液中；反应液在100mL反应瓶中回流反应3h，将溶液冷却到室温，然后减压蒸馏除去溶剂；将双(2-羟乙基)二硫醚溶于四氢呋喃溶液中得溶液C，将溶液C加入到上述反应瓶中，反应液在室温搅拌12h；减压蒸馏除去溶剂，然后加入二氯甲烷和蒸馏水的混合液萃取；然后收集有机相，用无水硫酸钠干燥；减压蒸馏除去溶剂，以正己烷与乙酸乙酯的混合液为展开剂，用200-300目硅胶柱进行分离制得金刚烷修饰萘酰亚胺中间体3；

6)将喜树碱和4-二甲氨基吡啶分散到无水二氯甲烷溶液中，然后向混合液中加入三光气得混合液D，混合液D在室温下搅拌30min；将步骤5)制备的金刚烷修饰萘酰亚胺中间体3溶于5mL二氯甲烷溶液中，逐滴加入到混合液D中，然后将反应液在室温条件下搅拌12h，所得溶液用蒸馏水萃取，收集有机溶剂，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，以乙酸乙酯为展开剂，用200-300目硅胶柱进行分离制得二硫键连接的金刚烷萘酰亚胺喜树碱前药；

7)将步骤2)制得的环糊精修饰透明质酸溶于蒸馏水得到溶液a，将溶液a稀释20倍得到溶液c，将步骤6)得到的二硫键连接的金刚烷萘酰亚胺喜树碱前药溶于二甲基亚砜中得到溶液b，然后将溶液c和溶液b混合均匀，制得刺激响应的靶向聚多糖超分子诊疗组装体。

3.根据权利要求2所述刺激响应的靶向聚多糖超分子诊疗组装体的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中透明质酸钠与磷酸缓冲溶液的用量比为0.006mmol/L，透明质酸钠、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基硫代琥珀酰亚胺的摩尔比为0.00018:0.875:0.875。