[发明专利]动物性控精液纯度的检测方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种动物性控精液纯度的检测方法，其特征在于，分别利用X精子引物对和Y精子引物对对待检测样本进行real-time PCR得到Ct_(xi)和Ct_(yi)，再得到Ct_(xi)和Ct_(yi)的平均值Ct_(i)，将待检测样本的Ct_(i)与标准曲线比对，得到待检测样本的纯度；

所述标准曲线包括标准品纯度与标准品Ct的对应关系，其中，所述标准品Ct为第一标准品中Ct_(x)与第二标准品中Ct_(y)的平均值；

利用X精子引物对对第一标准品进行real-time PCR得到Ct_(x)；

利用Y精子引物对对第二标准品进行real-time PCR得到Ct_(y)；

所述标准品包括不同已知浓度比的X精子与Y精子，所述第一标准品中X精子浓度与所述第二标准品中Y精子浓度相同。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述动物性控精液包括牛性控精液，X精子引物对优选为PLP基因引物对，Y精子引物对优选为SRY基因引物对。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述PLP基因引物对的序列如下：

PLP-F：5’-TGCTGCTCTCGTTTCACC-3’(SEQ ID NO.1)；

PLP-R：5’-CCCCACATTTGTCTTACC-3’(SEQ ID NO.2)；

优选地，所述SRY基因引物对的序列如下：

SRY-F：5’-GCCACAGAAATCGCTTCC-3’(SEQ ID NO.3)；

SRY-R：5’-CCGTGTAGCCAATGTTACCTT-3’(SEQ ID NO.4)。

4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述标准品中的X精子与Y精子均独立地为含有X精子独有基因的重组质粒与含有Y精子独有基因的重组质粒；

优选地，所述X精子独有基因包括PLP基因；

优选地，所述Y精子独有基因包括SRY基因。

5.一种检测动物性控精液纯度的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括X精子引物对、Y精子引物对和标准品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述动物性控精液包括牛性控精液，X精子引物对优选为PLP基因引物对，Y精子引物对优选为SRY基因引物对。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述PLP基因引物对的序列如下：

PLP-F：5’-TGCTGCTCTCGTTTCACC-3’(SEQ ID NO.1)；

PLP-R：5’-CCCCACATTTGTCTTACC-3’(SEQ ID NO.2)；

优选地，所述SRY基因引物对的序列如下：

SRY-F：5’-GCCACAGAAATCGCTTCC-3’(SEQ ID NO.3)；

SRY-R：5’-CCGTGTAGCCAATGTTACCTT-3’(SEQ ID NO.4)。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品为X精子与Y精子，所述X精子与Y精子均独立地单独包装或组合包装；

优选地，所述标准品为不同已知浓度比的X精子与Y精子的组合包装。

9.根据权利要求5-8任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品中的X精子与Y精子均独立地为含有X精子独有基因的重组质粒与含有Y精子独有基因的重组质粒；

优选地，所述X精子独有基因包括PLP基因；

优选地，所述Y精子独有基因包括SRY基因。

10.权利要求1-4任一项所述的检测方法或权利要求5-9任一项所述的试剂盒在评价动物性控精液产品质量中的应用。