[发明专利]从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法

权利要求书

1.一种从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、总黄酮提取液的制备：将原料平卧菊三七茎阴干、粉碎，以体积浓度为60％～80％的乙醇为溶剂进行超声提取，平卧菊三七茎粉料与乙醇溶液的料液比g/mL为1：10～1：20，提取次数为1～3次，提取时间为1～3h，超声功率为350～500W，之后过滤，合并滤液，真空减压浓缩至无溶剂，得总黄酮提取液；

步骤2、总黄酮的富集：步骤1中得到的总黄酮提取液经大孔吸附树脂吸附富集，先用8倍柱体积的水洗脱，再依次用6倍柱体积的体积浓度为20％、40％、60％、80％、90％的乙醇分别进行洗脱，收集体积浓度为40％的洗脱液，合并减压回收溶剂，冷冻干燥，得粗黄酮；

步骤3、高速逆流色谱分离纯化：第一两相溶剂体系由乙酸乙酯、正丁醇和水按体积比为1:1:1～1:4:8混匀后，静置分层得到，以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相先注入高速逆流色谱仪，待所述固定相充满整个柱子后，再注入流动相，调节逆流色谱仪转速至700～900rpm；待两相溶剂体系在逆流柱中达到动态平衡时，将步骤2得到的粗黄酮溶于所述两相溶剂体系，进样浓度为10mg/mL～50mg/mL，进样体积为20mL～50mL，进行高速逆流色谱分离；在所述高速逆流色谱分离时，以波长200～350nm的紫外检测器检测，根据色谱峰分别收集相应的峰组分，减压浓缩干燥，依次得到馏分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ；所述馏分Ⅰ中含有槲皮素；所述馏分Ⅱ中含有木犀草素；所述馏分Ⅲ中含有芹菜素；所述馏分Ⅳ中含有四羟基黄酮；所述馏分Ⅴ中含有7-甲醚黄芩素；

步骤4、制备色谱分离纯化：第二两相溶剂体系由正庚烷、乙酸乙酯、甲醇和水按体积比为1:1:1:1～1:4:6:8混匀后，静置分层得到，以上相为固定相，下相为流动相；将固定相注入制备色谱的螺旋管中，待螺旋管完全充满固定相后，开启主机，缓慢调整螺旋管转速到750～950r/min，同时泵入流动相，当螺旋管尾端流出流动相，系统达到动力学平衡，分别将步骤3中收集到的不同馏分通过进样阀注入螺旋管中，进行制备色谱分离，以波长200～300nm的紫外检测器检测，分别收集步骤3中不同馏分的最高峰馏分；然后，分别对最高峰馏分进行减压浓缩、冷冻干燥，得到纯度98％以上的槲皮素、木犀草素、芹菜素、四羟基黄酮、7-甲醚黄芩素。

2.根据权利要求1所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤1中，乙醇溶液的体积浓度优选为75％。

3.根据权利要求1或2所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤1中，平卧菊三七茎粉料与乙醇溶液的料液比g/mL优选为1:15。

4.根据权利要求1所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤2中，大孔吸附树脂为HPD-300、HPD-400、HPD-600、AB-8、或D-101大孔树脂。

5.根据权利要求1所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤2中，收集的体积浓度为40％的洗脱液为含有黄酮成分的洗脱液，是采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定。

6.根据权利要求1所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤3中，两相溶剂体系的乙酸乙酯、正丁醇和水的体积比为1:(2～4):(4～8)。

7.根据权利要求1所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤3中，进行高速逆流色谱分离时，固定相流速为10～20mL/min，流动相流速为1～3mL/min。

8.根据权利要求7所述的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其特征是：其步骤3中，进行高速逆流色谱分离时，分离柱转速为800rpm，流动相流速为3mL/min，紫外检测器波长为255nm，进样浓度为30mg/mL，进样体积为30mL。