[发明专利]从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法

说明书

本发明属于天然产物技术领域，公开一种从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其包括以下步骤：总黄酮提取液的制备；总黄酮的富集；高速逆流色谱分离纯化；制备色谱分离纯化；制备得到纯度98％以上的槲皮素、木犀草素、芹菜素、四羟基黄酮、7‑甲醚黄芩素。本发明能够一次性从平卧菊三七茎中分离纯化五种黄酮苷类化合物单体，有效提高了平卧菊三七茎中黄酮苷类化合物的提取效率、以及分离纯度和收率。

技术领域

本发明属于天然产物技术领域，涉及天然产物有效成分的提、分离技术领域，尤其是涉及一种从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法。

背景技术

平卧菊三七(Gynura procumbens(Lour.)Merr.)为菊科，三七属植物，又名蔓三七、蛇接骨、续命草、神仙草，味辛、微苦、性凉，为多年生草本药食两用植物，广泛分布在中国、马来西亚、泰国、印度尼西亚、韩国和菲律宾等国家。平卧菊三七具有广泛的药理作用，2009年上半年，中国疾病预防控制中心、国家食品质量监督检验中心、中国食品发酵工业研究院等有关单位完成了平卧菊三七毒理学检验、卫生学检验和多种成分的检验，结论是：无毒、无致畸影响；其有效成份具有通经活络，消炎止咳，散淤消肿，活血生肌，治疗跌打损伤，支气管肺炎、肺结核等功效；能延缓衰老、激活免疫细胞、改善机体免疫功能、提高人体免疫力，增强人体的新陈代谢并对记忆障碍有一定改善作用；具有降血压、降血脂、降血糖、抗氧化、抗溃疡和预防慢性肾病、抑制乙型肝炎的显著效果；对预防和治疗心脑血管疾病、糖尿病等有一定的疗效；还具有抗病毒、抗菌活性、抑制骨髓癌和志贺样毒素细胞的活性。另一方面，平卧菊三七是一种药食兼可的独特植物，具有极好的营养价值，因此，广泛利用于食品医药工业、日用化工工业等领域，是一种极具潜力和高经济价值的药食两用植物。但截至目前为止，对其功效成分及其作用机制研究还不够深入。

研究表明，平卧菊三七茎枝的活性成分主要有：黄酮类、三萜苷元类、甾醇类化合物以及香草醛、丁香醛、对羟基苯甲酸、对羟基桂皮酸、原儿茶酸等酚酸类化合物。现有技术中，关于平卧菊三七茎中提取得到的黄酮类化合物都是总黄酮，参见：樊迎等，平卧菊三七茎中总黄酮提取工艺的研究，食品安全导刊，2015年第34期；郑国栋等，微波辅助提取平卧菊三七茎中总黄酮的工艺研究，江苏农业科学，2015年08期；仅有少量从平卧菊三七全草中分析黄酮类化合物研究，参见：巩升帅等，平卧菊三七的化学成分研究(Ⅰ)，中草药，2016年11期，利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、中压柱色谱及半制备高效液相色谱等方法分离纯化，通过NMR、MS等鉴定化合物结构，从平卧菊三七全草的70％乙醇提取物中分离得到16个化合物。而从平卧菊三七茎中分离黄酮类化合物至今没有相关报道。

现有技术中，大多采用传统柱层析分离，重结晶等方法来提取分离黄酮类化合物，这些方法需要经过反复的柱层析分离，操作复杂，条件局限，耗时长，溶剂消耗量大，而且样品损失大，效果差。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种简单、高效、快速的从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，能够从平卧菊三七茎中分离纯化多个黄酮苷类化合物单体。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种从平卧菊三七茎中分离纯化高纯度黄酮苷类化合物的方法，其包括以下步骤：

步骤1、总黄酮提取液的制备：将原料平卧菊三七茎阴干、粉碎，以体积浓度为60％～80％的乙醇为溶剂进行超声提取，平卧菊三七茎粉料与乙醇溶液的料液比g/mL为1：10～1：20，提取次数为1～3次，提取时间为1～3h，超声功率为350～500W，之后过滤，合并滤液，真空减压浓缩至无溶剂，得总黄酮提取液；

步骤2、总黄酮的富集：步骤1中得到的总黄酮提取液经大孔吸附树脂吸附富集，先用8倍柱体积的水洗脱，再依次用6倍柱体积的体积浓度为20％、40％、60％、80％、90％的乙醇分别进行洗脱，收集体积浓度为40％的洗脱液，合并减压回收溶剂，冷冻干燥，得粗黄酮；