[发明专利]一种补体C3c的检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2包括偶联缓冲液、抗体偶联物以及保存液，所述偶联缓冲液的主要组分及浓度为：

2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 8-27g/L

所述保存液的各组分及浓度包括：

N,N-二羟乙基甘氨酸 1.3-9.8g/L

稳定剂 0.5-2g/L

防腐剂 0.8-2.0ml/L

所述抗体偶联物的各组分及浓度包括：

生物素 5-20g/L

链霉亲和素 5-20g/L

补体C3c抗体 0.05-3g/L

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.005-0.3g/L。

2.根据权利要求1所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液A、第一缓冲液B分别为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。

3.根据权利要求1或2所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。

4.根据权利要求3所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的稳定剂为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或两种以上混合物。

5.根据权利要求3所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的螯合剂为EDTA-2Na、焦磷酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖酸钠中的中的一种或两种以上混合物。

6.根据权利要求4所述的一种补体C3c的检测试剂盒，其特征在于：所述生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间。

7.如权利要求1-6任一项的补体C3c的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，

(1)、试剂R1制备

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液A和第一缓冲液B，搅拌至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀，之后投入氯化钠、EDTA-2Na，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入PEG6000和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

(2)、试剂R2制备

(2-1)、偶联缓冲液配制

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，搅拌至物料完全溶解，清澈透明，配液罐底部无沉淀，调整PH值到4.50-6.50之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

(2-2)、保存液配制

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸，搅拌至物料完全溶解，之后投入稳定剂，待物料完全溶解后再投入防腐剂，待清澈透明，配液罐底部无沉淀，调节pH值到6.30-8.50之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放备用，进行标识；

(2-3)、抗体偶联物的制备

将补体C3c抗体以偶联缓冲液稀释到0.05-3.0g/L的浓度,边搅拌边加入生物素，透析过夜，使其与生物素按一定比例结合，再加入一定比例的链霉亲和素，混匀，控制生物素结合补体C3c抗体的比例为1:1-3:1之间，链霉亲和素结合生物素-补体C3c抗体的比例为0.5:1-4:1之间，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以偶联缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应120分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，再加入保存液，将制备好的R2装入成品罐中，并定容至终浓度，进行标识。