[发明专利]一种犬细小病毒CPV-HuN1703株及其应用

权利要求书

1.一种犬细小病毒CPV-HuN1703株，其微生物保藏编号为CGMCC No.17583；分类命名：犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）；保藏时间是2019年04月24日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

2.根据权利要求1所述的犬细小病毒CPV-HuN1703株在制备治疗犬细小病毒感染药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的犬细小病毒CPV-HuN1703株在制备预防犬细小病毒感染的疫苗中的应用，所述疫苗为灭活疫苗。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的灭活疫苗是由佐剂和灭活的犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液制备而成。

5.根据权利要求4所述的应用，所述佐剂为所述的疫苗佐剂为氢氧化铝胶、矿物油、Gel01、蜂胶、ISA206和ISA760VG中的一种或几种。

6.根据权利要求4所述的应用，所述疫苗经由以下方法制备得到：

步骤a，按照常规方法培养猫肾传代细胞F81：生长液为含5%胎牛血清的MEM，其中生长液含青霉素钠和硫酸链霉素各100μg/mL，在37℃，5%CO₂培养箱中培养传代，待细胞生长至80%汇合度时，用PBS洗涤1次后更换为无血清培养基；

步骤b，取含量为5×10⁴TCID₅₀/ml 的犬细小病毒CPV-HuN1703株按5%的体积百分比接种到步骤a制备的长势良好的F81细胞，37℃吸附1小时，弃去吸附液，补加含有10 μg/mL胰蛋白酶的MEM作为维持液继续培养；

步骤c，接毒后，每日观察3次，记录细胞病变情况，待细胞病变率达80%以上时进行收获，-80℃反复冻融三次，8000 rpm离心15min，收集上清液，即为病毒液；

步骤d，将步骤c制备得到的病毒液经20倍浓缩后，加入0.2%甲醛37℃灭活24小时得到犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液；

步骤e，将犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液和佐剂在无菌环境中搅拌混合均匀，即制得所述灭活疫苗。

7.根据权利要求6所述的应用，所述佐剂为ISA206。

8.根据权利要求7所述的应用，所述灭活疫苗中含有犬细小病毒CPV-HuN1703株≥5.5×10⁵TCID₅₀/头份，ISA206 50% V/V。

9.根据权利要求6所述的应用，所述疫苗的使用方式为肌肉注射或滴鼻免疫。

10.根据权利要求9所述的应用，所述疫苗的使用方式为肌肉注射。