[发明专利]一种利用贝莱斯芽孢杆菌发酵提升烟叶品质的方法有效
| 申请号： | 201911084267.2 | 申请日： | 2019-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN110839940B | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 龙章德;刘鸿;苏赞;邹克兴;李季刚;薛云;孙建生;农李政;宁振兴;胡志忠;许春平;贾学伟;姜宇 | 申请（专利权）人： | 广西中烟工业有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;A24B15/20 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 李红团 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 贝莱斯 芽孢 杆菌 发酵 提升 烟叶 品质 方法 | ||
1.一种利用贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)发酵提升烟叶品质的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)菌种活化：从保藏培养基上挑取贝莱斯芽孢杆菌，接种到PDA培养基中活化培养1-2d；
(2)制备发酵液：将活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到烟末发酵培养基中，在25-30℃、150-200rpm的摇床中发酵24-48h，制备发酵液；
(3)离心：将步骤(2)中获制备的发酵液在8000-12000rpm离心5-15min，除去上清液，收集菌体；
(4)菌体重悬：将步骤(3)收集的菌体用无菌水进行重悬，使用分光光度计测定菌体浓度，将菌体浓度稀释为108cfu/mL，即为贝莱斯芽孢杆菌生物制剂；
(5)称取一定量的仓库复烤醇化烟叶；按照烟叶重量的0.05-0.2％称取上述制备好的贝莱斯芽孢杆菌生物制剂；称取烟叶重量10％的无菌水；
(6)将称好的生物制剂加入无菌水中混匀，均匀喷洒在烟叶上，密封好，在30-37℃、RH75％发酵24-60h；
(7)将处理好的烟叶置于40℃条件下烘干至含水量12％w/w，获得发酵烟叶；
所述贝莱斯芽孢杆菌为中国工业微生物菌种保藏中心保藏的保藏号为CICC21094的贝莱斯芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述PDA培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15g、去离子水1000ml、自然pH。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中活化培养1d。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述烟末发酵培养基配方为：烟末3.0g/L、酵母粉5.0g/L、NaCl 10g/L，pH＝7.0。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中发酵温度为25℃，摇床的转速为150rpm，发酵的时间为24h。
6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(3)中离心速度为8000rpm，离心时间为5min。
7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(5)中贝莱斯芽孢杆菌生物制剂的用量为烟叶重量的0.05％。
8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(6)中所述发酵温度为30℃，发酵时间为24h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，提升烟叶品质包括丰富烟叶的香气、降低卷烟的刺激性、改善口感、减少杂气以及增加卷烟烟气的甜润感。
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