[发明专利]一种利用贝莱斯芽孢杆菌发酵提升烟叶品质的方法

说明书

本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种利用贝莱斯芽孢杆菌发酵提升烟叶品质的方法。具体方法为将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)进行菌种活化、发酵制备成生物制剂，然后均匀喷施于烟叶表面进行发酵。经过发酵后，烟叶中淀粉的降解率可达20.2‑36.2％，烟叶中的香味物质增加。感官评吸结果表明，处理烟叶的香气质提升，香气量增加，浓度增加，口感改善，甜润感增加，杂气减少，品质显著提升。

技术领域

本发明属于农业微生物技术领域，具体地，本发明涉及一种利用贝莱斯芽孢杆菌发酵提升烟叶品质的方法。

背景技术

烟叶发酵是提高烟叶可用性和卷烟感官质量的一种加工方法，经发酵后的烟叶，可以弥补烟叶本身不同程度的品质缺陷，如减轻烟叶本身的青杂气、降低刺激性，提升卷烟香气质和香气量，改善抽吸时的余味和吸味等。合适的发酵工艺可以极大改善烟叶的品质，提高卷烟质量，是卷烟加工中极为重要的步骤。

烟叶中含有上千种各种各样的化合物，包括非挥发性的大分子物质比如纤维素、淀粉、蛋白质以及果胶等；也含有大量的半挥发性和挥发性的小分子物质，比如各种酸类、醇类、醛类以及酯类等化合物。这些化合物的种类和含量比例决定了烟叶的品质。其中，淀粉是一类对烟叶品质影响比较大的多糖。烟叶淀粉含量过高，在烟支燃烧时会影响燃烧速度和燃烧的完全性，而且会产生焦糊味和杂气，降低卷烟的感官质量。而小分子的醇类、醛类、酯类、酮类、吡啶类以及吡嗪类等物质则对烟叶的香气品质有重要影响。筛选合适的微生物用于发酵烟叶，将烟叶中的淀粉转化为还原糖，可以减少卷烟的杂气，改善口感。利用微生物在烟叶发酵过程中代谢生成各种与烟气相谐调的香味物质，则可以提高烟叶的香气品质。

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)属于芽孢杆菌属。作为一个独立菌种，其与近缘枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌的分类相似性仅有90％。目前对该菌种的研究集中在植物抗病、抗虫以及粮食作物增产方法，研究表明其能产生多种抗菌肽和抗生素。对于该菌种在抗菌之外其他领域发酵，特别是烟草发酵方面应用的研究尚处于空白

发明内容

为进一步丰富烟叶发酵的菌株，提供更高、更丰富的烟叶发酵品质和口感。申请人尝试使用贝莱斯芽孢杆菌发酵烟叶，实现了良好的提升卷烟品质效果。

一方面，本发明提供了贝莱斯芽孢杆菌在提升烟叶品种中的应用。

进一步地，使用贝莱斯芽孢杆菌对烟叶进行发酵。

进一步地，所用贝莱斯芽孢杆菌为中国工业微生物菌种保藏中心保藏的保藏号为CICC21094的贝莱斯芽孢杆菌。

进一步地，具体发酵步骤为：

(1)菌种活化：从保藏培养基上挑取贝莱斯芽孢杆菌，接种到PDA培养基中活化培养1-2d；

(2)制备发酵液：将活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到烟末发酵培养基中，在25-30℃、150-200rpm的摇床中发酵24-48h制备发酵液；

(3)离心：将步骤(2)中的发酵液在8000-12000rpm离心5-15min，除去上清液，收集菌体；

(4)菌体重悬：将步骤(3)收集的菌体用无菌水进行重悬，使用分光光度计测定菌体浓度，将菌体浓度稀释为10⁸cfu/mL，即为贝莱斯芽孢杆菌生物制剂；

(5)称取一定量的仓库复烤醇化烟叶；按照烟叶重量的0.05-0.2％称取上述制备好的贝莱斯芽孢杆菌生物制剂；称取烟叶重量10％的无菌水；

(6)将称好的贝莱斯芽孢杆菌生物制剂加入无菌水中混匀，均匀喷洒在烟叶上，密封好，在30-37℃、RH75％发酵24-60h；

(7)将处理好的烟叶置于40℃条件下烘干至含水量12％w/w，获得发酵烟叶。