[发明专利]猪口蹄疫病毒A型抗体酶联免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种猪口蹄疫病毒A型抗体酶联免疫检测试剂盒。它包括口蹄疫病毒A型抗原表位多肽包被的酶联反应板和酶标记抗抗体；所述口蹄疫病毒A型抗原表位多肽为序列表中序列1所示的多肽或序列2所示的多肽。本试剂盒使用化学合成抗原肽包被反应板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在口蹄疫病毒感染。本发明试剂盒特异性好、敏感、高效，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种口蹄疫病毒A型抗体酶联免疫检测试剂盒，特别是猪口蹄疫病毒A型抗体酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种烈性传染病。口蹄疫的致死率很低，但是感染率很高。发病的主要症状为：口腔粘膜、舌、唇、鼻镜、蹄叉、乳头等部位发生水疱，破溃形成烂斑，病畜蹄痛卧地、严重者蹄壳边缘溃裂或脱壳。不同动物的症状稍有不同，妊娠母牛可能流产，而后导致繁殖力降低；猪则以破蹄为最主要症状；山羊和绵羊的症状通常比牛温和。口蹄疫传染性高，传播迅速，感染猪、牛、羊等牲畜常导致幼畜死亡，成年动物生产能力急剧下降，严重危害畜牧业的发展和畜产品的生产供应。由于其在世界范围内广泛分布，能感染70多种家养和野生动物，且发病率极高(约为100％)，严重影响畜牧业生产和国际贸易，因而受到各国的高度重视，被世界动物卫生组织(Office International DesEpizooties,OIE)列为法定报告动物疫病。

口蹄疫病毒(FMDV)是小RNA病毒科(picornavi-ridae)，口蹄疫病毒属(aphthovirus)的成员，由一条长约8500个核苷酸的单股、正链RNA和衣壳蛋白组成。病毒衣壳由4种结构蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VP1和VP3是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒(FMDV)具有多型性、易变性等特点，具有7个血清型，分别为A、O、C、SATI、SATII、SATIII及AsiaI型，每个型又可分为若干个亚型，目前发现的亚型有70多个。由于不断发生抗原漂移，因此并不能严格区分亚型。血清型间几乎无交叉免疫反应，同一型内部不同毒株之间抗原性也有一定变化，这就给口蹄疫的诊断和防治工作带来很大难度。

口蹄疫的防控主要是疫苗免疫及屠宰感染和可疑畜群。我国对口蹄疫施行强制性免疫，每年春秋进行一次集中免疫，两次之间对新补栏家畜及时进行补免。在实际生产中如何鉴别诊断易感动物是进行了疫苗免疫还是感染了口蹄疫病毒对口蹄疫防疫体系的建立、检验检疫都是十分重要的。用于口蹄疫诊断的血清学技术有补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中和试验(VNT)、间接血凝试验(IHA)等，其中ELISA是最常用的方法。ELISA的基本原理是将抗原或者抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶反应，通过底物显色后用肉眼或者分光光度计判定结果。ELISA方法具有特异、敏感、快速、简便、可靠性好等特点，且能自动化操作，并能迅速的检测大量样品，在FMD的诊断中日益受到人们的重视，现已成为国际上检测易感动物猪、牛等是否疫苗免疫或感染病毒的常规方法之一。

间接ELISA方法过程简单易于操作，并且有较高的敏感性。1997年意大利的De等建立了基于FMDV的间接捕获ELISA技术，这种ELISA用单抗来捕获在大肠杆菌中表达的FMDV，用此ELISA检测了大量疫苗免疫动物和感染动物，所有经过攻毒试验的动物其ELISA试验的OD值都大于0.2，超过99％的经过疫苗免疫动物ELISA结果为阴性(即小于0.2)。以上数据显示该方法敏感性很高。后经特异性试验证实，该方法的特异性超过99.5％。此方法可在免疫后8天测出抗体，1年后仍能测出此抗体。2003年朱彩珠等建立了一种用于区分FMDV感染动物和疫苗免疫动物的间接ELISA，这种ELISA利用大肠杆菌表达的FMDV3ABC作为抗原。试验结果证明，该ELISA方法的准确性比病毒感染相关抗原琼脂糖凝胶免疫扩散试验(VIAAAGID)高。