[发明专利]一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法

权利要求书

1.一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：母株选取：选择生长期为55～65天且生长良好、无病虫害、无损伤的兰州百合原种植株苗，剪取第10～14片叶子以上至顶端的干茎作为外植体，且其上含有至少四片叶子或至少两个株芽点；

S2：茎段处理：将步骤S1中剪取的干茎清洗灭菌，得到灭菌的茎段；

S3：茎段培养：将步骤S2中得到的茎段切成1～1.5cm的长度，然后将两端切面和株芽点烤3～5s，再插入组培苗培养基中；控制温度20～26℃，光照强度2000～2500lx，每日光照时间10～12h进行培养；

培养25～35天后茎段的株芽点上即可长出不定芽，再将水与水溶性壳寡糖按5～2:1的比例稀释，在每个不定芽上注射的壳寡糖稀释液；

S4：继代培养：注射壳寡糖稀释液12～16天后将不定芽切除，然后将不定芽放入添加EDTA稀释剂的继代培养基中，经继代培养18～25天后即得无菌组培苗；

S5：无菌组培苗培养：将步骤S4中得到的无菌组培苗放在温度39±1℃、光照强度为2000～3000lx、每日光照12～14h的条件下培养25～30天；再转入温度为25±1℃、光照强度2000～2500lx、每日光照7～9h的条件下培养18～22天，即得热处理的组培苗；

S6：组培苗茎尖培养：将步骤S5得到的热处理组培苗作为脱毒材料，剥取0.2～0.5mm的茎尖，然后放入茎尖培养基中，控制温度20～26℃、光照强度为2000～25001x、每日光照时间为10～12h的条件下进行培养，经过29～42天后即得脱毒茎尖；

S7：茎段脱毒培养：剪取1～1.5cm的所述脱毒茎尖，放于质量浓度0.01～0.1g/ml的普通洗衣粉水中浸泡5～12min，取出清洗灭菌；

然后按1.0～1.5mm、0.8～1.0mm、0.5～0.8mm、0.3～0.5mm、小于0.3 mm切取不同大小茎尖生长点，并放入脱毒培养基中；控制温度22～28℃、光照强度为2000～25001x、每日光照时间12～15h的条件下进行培养，培养25～35天后即得脱毒茎尖；

S8：茎尖鳞茎诱导培养：将步骤S7得到的脱毒茎尖放入鳞茎诱导培养基中，培养30～40天后即分化出小鳞茎；

S9：小鳞茎增殖培养：将步骤S8得到的小鳞茎放入增殖培养基中，控制温度22～25℃、光照强度为2000～25001x、每日光照时间为15～22h的条件下进行培养，经过25～30天后即得增殖鳞茎；

S10：增值鳞茎生根培养：将步骤S9的到的增殖鳞茎放入生根培养基中；控制温度20～25℃、光照强度为2000～2500lx、每日光照时间为8～10h的条件下进行培养，经过25～35天后即得直径为0.5～1cm的鳞茎球；

S11：休眠冷藏：将步骤S10得到的鳞茎球放入冷库中，控制温度5±0.5℃，经4～6周低温处理后，于-2～0℃冷库中冷藏即可。

2.根据权利要求1所述的兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，其特征在于，步骤S2中所述的中性洗涤剂是指：将普通洗衣粉按质量份1:75的比例进行稀释得到的水溶液。

3.根据权利要求1所述的兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，其特征在于，步骤S3中所述的组培苗培养基是指在MS培养基中按1.0～2.0mg/L添加6-苄基嘌呤、0.1～0.5mg/L添加萘乙酸所得的pH值为5.8的培养基。

4.根据权利要求1所述的兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，其特征在于，步骤S6中所述的茎尖培养基是指在MS培养基中按6mg/L添加病毒唑、0.3～0.5mg/L添加6-苄基嘌呤、0.1～0.3mg/L添加萘乙酸所得的pH值为5.8的培养基。

5.根据权利要求1所述的兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，其特征在于，步骤S7中所述的脱毒培养基是指在MS培养基中按0.05mg/L添加6-苄基嘌呤、0.05mg/L添加萘乙酸所得的pH值为4.9的培养基。