[发明专利]一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法

说明书

本发明公开了一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，包括以下步骤：S1母株选取；S2茎段处理；S3茎段培养；S4切除不定芽进行继代培养；S5无菌组培苗培养；S6组培苗茎尖培养；S7茎段脱毒培养；S8茎尖鳞茎诱导培养；S9小鳞茎增殖培养；S10增值鳞茎生根培养；S11休眠冷藏。通过本发明的工艺手段，可使用百合干茎培育出鳞茎球，从而大大降低百合脱毒组培中对优质百合种球的消耗，降低培育成本；培育是选用优质百合植株作为外植体，可保证组培扩繁得到的鳞茎种球继承优良基因，使用该鳞茎种球种植可提高百合的产量和优品率，从而提高种植户的收入。

技术领域

本发明属于百合生产技术领域，具体涉及一种百合植株茎段组织培养与快繁方法。

背景技术

兰州百合适宜于旱地栽培，对生态环境的条件要求较高。一般要达到海拔1800～2200米左右，土层深厚，质地松软；坡度要求15度以上，便于排水，有机质丰富；气候要求冷凉温润，昼夜温差大等种植条件，且生长期长达6-9年。由于兰州百合的种植长期采用无性繁殖，因此百合种球都是多年自留和传种的原始盘种状态。长期种植使得植株病毒感染很普遍，造成了兰州百合质量退化和产量下降，影响增收，严重制约着兰州百合的发展，因而研究无病毒植株具有非常重要的价值。

通过病毒检测研究，确定了危害兰州百合的病毒主要有黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)及百合无症状病毒(LSV)，感染率达100%，且为3种病毒复合侵染。病毒感染后百合表现出不同程度的株体矮小、叶色浅黄症状，造成品质下降减产。解决兰州百合品种及品质退化，获得无病毒植株的途径有自然选择、物理学方法、化学药剂处理、生物学方法，其中最行之有效的方法便是生物脱毒方法。

传统的生物脱毒主要使用百合鳞片为外植体，由于鳞片需选用中层瓣大肉厚的鳞片，外层和内层的鳞片一般全部丢弃，因此导致优质种球消耗巨大，培育繁殖成本较高。

发明内容

本发明提供了一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，目的在于解决现有百合脱毒组培繁育过程中优质种球消耗巨大，导致培育成本较高的问题。

为此，本发明采用如下技术方案：

一种兰州百合植株茎段组织培养与快繁方法，包括以下步骤：

S1：母株选取：选择生长期为55～65天且生长良好、无病虫害、无损伤的兰州百合原种植株苗，剪取第10～14片叶子以上至顶端的干茎作为外植体，且其上含有至少四片叶子或至少两个株芽点；

S2：茎段处理：将步骤S1中剪取的干茎清洗灭菌，得到灭菌的茎段；

S3：茎段培养：将步骤S2中得到的茎段切成1～1.5cm的长度，然后将两端切面和株芽点烤3～5s，再插入组培苗培养基中；控制温度20～26℃，光照强度2000～2500lx，每日光照时间10～12h进行培养；

培养25～35天后茎段的株芽点上即可长出不定芽，再将水与水溶性壳寡糖按2～5:1的比例稀释，在每个不定芽上注射的壳寡糖稀释液；

S4：继代培养：注射壳寡糖稀释液12～16天后将不定芽切除，然后将不定芽放入添加EDTA稀释剂的继代培养基中，经继代培养18～25天后即得无菌组培苗；

S5：无菌组培苗培养：将步骤S4中得到的无菌组培苗放在温度39±1℃、光照强度为2000～3000lx、每日光照12～14h的条件下培养25～30天；再转入温度为25±1℃、光照强度2000～2500lx、每日光照7～9h的条件下培养18～22天，即得热处理的组培苗；

S6：组培苗茎尖培养：将步骤S5得到的热处理组培苗作为脱毒材料，剥取0.2～0.5mm的茎尖，然后放入茎尖培养基中，控制温度20～26℃、光照强度为2000～25001x、每日光照时间为10～12h的条件下进行培养，经过29～42天后即得脱毒茎尖；