[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其应用

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞表达特异性结合抗原的嵌合抗原受体、IL-7和CCL19；

所述CCL19的启动子为NFAT调控启动子；

所述NFAT调控启动子的核酸序列如SEQ ID NO:20所示；

所述IL-7的信号肽为IL-2信号肽；

所述IL-2信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述IL-7的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述CCL19的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域；

所述抗原结合结构域为靶向GPC3的单链抗体；

所述靶向GPC3的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；

所述跨膜结构域为CD28跨膜结构域；

所述CD28跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述胞内共刺激信号传导结构域为CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2的组合；

所述CD28胞内结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；

所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；

所述TLR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；

所述嵌合抗原受体还包括信号肽，所述信号肽为GM-CSF信号肽；

所述GM-CSF信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；

所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、GPC3抗原结合结构域、CD28跨膜结构域、CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2串联组成；

所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

2.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体用于制备如权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞；

所述表达载体包括编码嵌合抗原受体的核酸分子、编码2A肽的核酸分子、编码IL-2信号肽的核酸分子、编码IL-7的核酸分子、编码2A肽的核酸分子、NFAT调控启动子和编码CCL19的核酸分子；

所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、GPC3抗原结合结构域、CD28跨膜结构域、CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2串联组成；

所述GM-CSF信号肽的核酸序列如SEQ ID NO:11所示；

所述GPC3抗原结合结构域的核酸序列如SEQ ID NO:12所示；

所述CD28跨膜结构域的核酸序列如SEQ ID NO:13所示；

所述CD28胞内结构域的核酸序列如SEQ ID NO:14所示；

所述CD3ζ的核酸序列如SEQ ID NO:15所示；

所述TLR2的核酸序列如SEQ ID NO:16所示；

所述编码IL-2信号肽的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:17所示；

所述编码IL-7的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:18所示；

所述编码2A肽的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:19所示；

所述编码CCL19的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:21所示。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为病毒载体；

所述病毒载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒载体。

5.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用如权利要求4所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到；

所述哺乳细胞为293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。

6.一种如权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求2-4任一项所述的表达载体或如权利要求5所述的重组慢病毒导入T细胞的步骤。