[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其应用有效
申请号: | 201911095182.4 | 申请日: | 2019-11-11 |
公开(公告)号: | CN110684739B | 公开(公告)日: | 2022-05-27 |
发明(设计)人: | 李鹏;师靖轩;汤朝阳;秦乐;姚瑶;林思妙 | 申请(专利权)人: | 深圳市体内生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/00 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 巩克栋 |
地址: | 518102 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 嵌合 抗原 受体 细胞 及其 应用 | ||
1.一种嵌合抗原受体T细胞,其特征在于,所述嵌合抗原受体T细胞表达特异性结合抗原的嵌合抗原受体、IL-7和CCL19;
所述CCL19的启动子为NFAT调控启动子;
所述NFAT调控启动子的核酸序列如SEQ ID NO:20所示;
所述IL-7的信号肽为IL-2信号肽;
所述IL-2信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;
所述IL-7的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;
所述CCL19的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示;
所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域;
所述抗原结合结构域为靶向GPC3的单链抗体;
所述靶向GPC3的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;
所述跨膜结构域为CD28跨膜结构域;
所述CD28跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;
所述胞内共刺激信号传导结构域为CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2的组合;
所述CD28胞内结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;
所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示;
所述TLR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示;
所述嵌合抗原受体还包括信号肽,所述信号肽为GM-CSF信号肽;
所述GM-CSF信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示;
所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、GPC3抗原结合结构域、CD28跨膜结构域、CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2串联组成;
所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
2.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体用于制备如权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞;
所述表达载体包括编码嵌合抗原受体的核酸分子、编码2A肽的核酸分子、编码IL-2信号肽的核酸分子、编码IL-7的核酸分子、编码2A肽的核酸分子、NFAT调控启动子和编码CCL19的核酸分子;
所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、GPC3抗原结合结构域、CD28跨膜结构域、CD28胞内结构域、CD3ζ和TLR2串联组成;
所述GM-CSF信号肽的核酸序列如SEQ ID NO:11所示;
所述GPC3抗原结合结构域的核酸序列如SEQ ID NO:12所示;
所述CD28跨膜结构域的核酸序列如SEQ ID NO:13所示;
所述CD28胞内结构域的核酸序列如SEQ ID NO:14所示;
所述CD3ζ的核酸序列如SEQ ID NO:15所示;
所述TLR2的核酸序列如SEQ ID NO:16所示;
所述编码IL-2信号肽的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:17所示;
所述编码IL-7的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:18所示;
所述编码2A肽的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:19所示;
所述编码CCL19的核酸分子的核酸序列如SEQ ID NO:21所示。
3.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为病毒载体;
所述病毒载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为慢病毒载体。
5.一种重组慢病毒,其特征在于,所述重组慢病毒采用如权利要求4所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到;
所述哺乳细胞为293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。
6.一种如权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞的制备方法,其特征在于,所述方法包括将如权利要求2-4任一项所述的表达载体或如权利要求5所述的重组慢病毒导入T细胞的步骤。
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