[发明专利]阻止软骨细胞去分化的培育方法

权利要求书

1.一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将人关节软骨组织用胶原酶消化；

S2.将细胞用PBS稀释后，离心收集细胞 ；

S3.用PBS离心洗涤，获取原代人软骨细胞；

S4.将原代人软骨细胞在培养基中培养5-7代，所述培养基包括以下组分：10-15％的血清、氨基酸、生长因子。

2.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：所述培养基包括以下组分和配比：10-15％的血清；所述氨基酸包括L-精氨酸150.0-200.0mg/L、L-门冬氨酸8.0-10.0mg/L、L-谷氨酸6.0-12.0mg/L、甘氨酸15.0-18.0mg/L、L-组氨酸18.0-20.0mg/L、L-羟脯氨酸12.0-16.0mg/L、L-异亮氨酸20.0-30.0mg/L、L-亮氨酸25.0-35.0mg/L、L-甲硫氨酸20.0-25.0mg/L、L-苯丙氨酸6.0-10.0mg/L、L-脯氨酸16.0-20.0mg/L、L-丝氨酸35.0-40.0mg/L、L-苏氨酸7.0-15.0mg/L、L-色氨酸8.0-10.0mg/L、L-酪氨酸15.0-20.0mg/L、L-缬氨酸10.0-16.0mg/L；所述生长因子包括：碱性成纤维生长因子25-45ug/L、表皮生长因子5-25ug/L、骨形成蛋白10-25ug/L、血小板衍生生长因子15-35ug/L、白介素-60.5-2.5ug/L；余量为F12基础培养基。

3.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：所述培养基包括以下组分和配比：12-15％的血清；所述氨基酸包括L-精氨酸160.0-180.0mg/L、L-门冬氨酸8.0-10.0mg/L、L-谷氨酸8.0-10.0mg/L、甘氨酸15.0-17.0mg/L、L-组氨酸18.0-20.0mg/L、L-羟脯氨酸14.0-16.0mg/L、L-异亮氨酸22.0-28.0mg/L、L-亮氨酸28.0-32.0mg/L、L-甲硫氨酸22.0-24.0mg/L、L-苯丙氨酸7.0-9.0mg/L、L-脯氨酸17.0-19.0mg/L、L-丝氨酸37.0-39.0mg/L、L-苏氨酸10.0-15.0mg/L、L-色氨酸8.0-10.0mg/L、L-酪氨酸16.0-18.0mg/L、L-缬氨酸12.0-16.0mg/L；所述生长因子包括：碱性成纤维生长因子30-40ug/L、表皮生长因子10-20ug/L、骨形成蛋白15-20ug/L、血小板衍生生长因子20-30ug/L、白介素-6 1.0-2.0ug/L；余量为F12基础培养基。

4.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：所述培养基包括以下组分和配比：15％的血清；所述氨基酸包括L-精氨酸170.0mg/L、L-门冬氨酸9.0mg/L、L-谷氨酸9.0mg/L、甘氨酸16.0mg/L、L-组氨酸19.0mg/L、L-羟脯氨酸15.0mg/L、L-异亮氨酸25.0mg/L、L-亮氨酸30.0mg/L、L-甲硫氨酸23.0mg/L、L-苯丙氨酸8.0mg/L、L-脯氨酸18.0mg/L、L-丝氨酸38.0mg/L、L-苏氨酸12.0mg/L、L-色氨酸9.0mg/L、L-酪氨酸17.0mg/L、L-缬氨酸14.0mg/L；所述生长因子包括：碱性成纤维生长因子35ug/L、表皮生长因子15ug/L、骨形成蛋白18ug/L、血小板衍生生长因子25ug/L、白介素-6 1.5ug/L；余量为F12基础培养基。

5.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：步骤S1中胶原酶为0.5-2% II型胶原酶。

6.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，其特征在于：步骤S1中胶原酶为1.5% II型胶原酶。