[发明专利]阻止软骨细胞去分化的培育方法

说明书

本发明公开了一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，包括以下步骤：S1.将人关节软骨组织用胶原酶消化；S2.将细胞用PBS稀释后，离心收集细胞；S3.用PBS离心洗涤，获取原代人软骨细胞；S4.将原代人软骨细胞在培养基中培养5‑7代，所述培养基包括以下组分：10‑15％的血清、氨基酸、生长因子。本发明的阻止软骨细胞去分化的培育方法能够有效的将去分化软骨细胞进行逆转，进而很好的保持了正常软骨细胞的能力，从而为将其运用于自体软骨细胞移植奠定了实验基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种阻止软骨细胞去分化的培育方法。

背景技术

关节软骨主要是由软骨细胞和细胞外基质组成的无血管组织，软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞类型，其主要功能是通过分泌II型胶原及蛋白多糖等保持关节软骨的功能。软骨细胞主要依靠关节的运动和挤压吸收营养物质，最重要的是软骨组织缺乏血管、淋巴和神经系统，所以软骨损伤后自我修复能力比较弱，其损伤后的修复移植一直以来是医学界的难题之一。经过十多年的临床应用及技术发展，自体软骨细胞移植技术已成为临床治疗软骨损伤最有效的方法，但临床研究对患者组织取材有限，并且也因为软骨细胞是终末分化细胞，体外增殖能力有限且易去分化，所以对体外软骨细胞的培养和扩增成为目前要解决的关键。

现有技术中的培育方法随着传代次数增加，软骨细胞很容易去分化呈现纤维细胞状态，无法分泌软骨细胞分泌的软骨特异性Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖，失去正常软骨细胞状态，如果能够研究一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，将能够很好的解决上述技术问题。

发明内容

本发明就是为了解决上述技术问题，所提供了一种阻止软骨细胞去分化的培育方法。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种阻止软骨细胞去分化的培育方法，包括以下步骤：

S1.将人关节软骨组织用胶原酶消化；

S2.将细胞用PBS稀释后，离心收集细胞；

S3.用PBS离心洗涤，获取原代人软骨细胞；

S4.将原代人软骨细胞在培养基中培养5-7代，所述培养基包括以下组分：10-15％的血清、氨基酸、生长因子。

进一步的，所述培养基包括以下组分和配比：10-15％的血清；所述氨基酸包括L-精氨酸150.0-200.0mg/L、L-门冬氨酸8.0-10.0mg/L、 L-谷氨酸6.0-12.0mg/L、甘氨酸15.0-18.0mg/L、L-组氨酸 18.0-20.0mg/L、L-羟脯氨酸12.0-16.0mg/L、L-异亮氨酸20.0-30.0mg/L、 L-亮氨酸25.0-35.0mg/L、L-甲硫氨酸20.0-25.0mg/L、L-苯丙氨酸6.0-10.0mg/L、L-脯氨酸16.0-20.0mg/L、L-丝氨酸35.0-40.0mg/L、 L-苏氨酸7.0-15.0mg/L、L-色氨酸8.0-10.0mg/L、L-酪氨酸 15.0-20.0mg/L、L-缬氨酸10.0-16.0mg/L；所述生长因子包括：碱性成纤维生长因子25-45ug/L、表皮生长因子5-25ug/L、骨形成蛋白 10-25ug/L、血小板衍生生长因子15-35ug/L、白介素-60.5-2.5ug/L；余量为F12基础培养基。