[发明专利]一种固定化糖基转移酶催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M的方法

权利要求书

1.一种固定化糖基转移酶催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将糖基转移酶UGT1和糖基转移酶UGT2交联在活化后的壳聚糖小球上，获得固定化糖基转移酶；

(2)向容器中加入莱鲍迪苷A，加入尿苷二磷酸葡萄糖，加入所述固定化糖基转移酶催化，得到莱鲍迪苷M；

所述糖基转移酶UGT1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述糖基转移酶UGT2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述方法，其特征是所述步骤(1)为：按1g:10-20mL的比例，将活化后的壳聚糖小球与浓度为0.025-0.1mg/mL的糖基转移酶UGT1水溶液混匀，在15-20℃条件下交联8-20h，过滤，固体用去离子水清洗干净后，得到固定化糖基转移酶UGT1；按1g:10-20mL的比例，将活化后的壳聚糖小球与浓度为0.025-0.1mg/mL的糖基转移酶UGT2水溶液混匀，在15-20℃条件下交联8-20h，过滤，固体用去离子水清洗干净后，得到固定化糖基转移酶UGT2；将所述固定化糖基转移酶UGT1和固定化糖基转移酶UGT2混合，获得固定化糖基转移酶。

3.根据权利要求2所述方法，其特征是所述固定化糖基转移酶UGT1中的糖基转移酶UGT1和固定化糖基转移酶UGT2中的糖基转移酶UGT2的质量比为1：1-12。

4.根据权利要求1所述方法，其特征是所述步骤(1)为：按1g:10-20mL的比例，将活化后的壳聚糖小球与浓度为0.025-0.1mg/mL的糖基转移酶的混合物水溶液混匀，在15-20℃条件下交联8-20h，过滤，固体用去离子水清洗干净后，得到固定化糖基转移酶；所述糖基转移酶的混合物由质量比为1：1-12的糖基转移酶UGT1和糖基转移酶UGT2组成。

5.根据权利要求1-4之一所述方法，其特征是所述活化后的壳聚糖小球用下述方法制成：

(1)用体积浓度1％-3％的醋酸水溶液溶解壳聚糖粉末，加热至40-60℃，超声至溶液均一透明，得到20-60g/L的壳聚糖溶液；

(2)将所述壳聚糖溶液滴入浓度为3-6mM NaOH水溶液中，静置，洗涤，得到直径为0.1-3.5mm的壳聚糖小球；

(3)按1g:20-40mL的比例，将壳聚糖小球与体积浓度为0.01％-0.5％的戊二醛水溶液混合，交联活化，得到活化后的壳聚糖小球。

6.根据权利要求1所述方法，其特征是步骤(2)为：

向容器中加入终浓度为0.4-20mM的莱鲍迪苷A中，加入相当于莱鲍迪苷A摩尔的3-4倍的尿苷二磷酸葡萄糖，再加入终浓度为200-300g/L所述固定化糖基转移酶，溶剂为水，在25-37℃催化反应20-72小时，得到莱鲍迪苷M。