[发明专利]流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗，其特征在于，所述仿生纳米疫苗包括流感病毒小体、小粒径氟化颗粒及DNA疫苗，所述仿生纳米疫苗为核壳结构的纳米体系，所述流感病毒小体为含有流感病毒囊膜蛋白的脂质囊泡，所述纳米体系的内核为负载DNA疫苗的小粒径氟化颗粒，所述流感病毒小体包裹于内核表面，所述流感病毒小体来源于流感病毒，所述流感病毒包括H1N1、H3N2、H5N1、H7N9或H9N2亚型，所述小粒径氟化颗粒为氟化修饰的阳离子聚合物包裹金颗粒形成的纳米结构，所述阳离子聚合物为基因载体，包括聚胺类、聚酰胺-胺类、超支化聚酰胺-胺、聚甲基丙烯酸酯类、聚氨基酸类、聚酯类或天然多糖类中的一种或几种，所述金颗粒粒径为10~30 nm。

2.权利要求1所述的流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）VI的制备：将流感病毒加1,2-二己酰卵磷脂冰浴，超速离心1.5 h，收集上清，将上清置于HBS缓冲液中透析，去除1,2-二己酰卵磷脂，获得重组的VI；

2）氟化修饰的阳离子聚合物合成：按照阳离子聚合物中氨基、七氟丁酸酐及三乙胺摩尔比为1:3:1.2进行反应，反应介质为甲醇，室温搅拌，反应结束后，将反应产物在pH 3~4的去离子水中透析，冷冻干燥获得氟化修饰的阳离子聚合物；

3）FAu制备：取粒径为10~30 nm的金颗粒缓慢滴加到氟化修饰阳离子聚合物中，缓慢轻摇，离心，收集沉淀即为小粒径的氟化颗粒FAu；

4）负载DNA疫苗的FAu制备：取步骤3）中的FAu，与DNA疫苗混合，缓慢轻摇，阳离子聚合物与DNA质量比为1.5~3，获得负载DNA疫苗的小粒径氟化颗粒；

5）流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗的制备：取步骤1）中重组的VI与步骤4）中小粒径氟化颗粒混合，用挤出仪来回挤出，离心收集得到流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗。

3.根据权利要求2所述的流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤3）的氟化修饰阳离子聚合物浓度为5~10 mg/mL。

4.根据权利要求2所述的流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤4）的DNA疫苗包括流感病毒的核蛋白、基质蛋白、膜蛋白、血凝素或神经氨酸酶的全长DNA序列或其部分DNA序列。

5.根据权利要求2所述的流感病毒小体包被的仿生纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤5）的挤出仪滤膜孔大小为50~100 nm。