[发明专利]一种红景天药材指纹图谱测定方法

说明书

本发明提供了一种红景天HPLC的指纹图谱，为红景天质量综合评价提供可行方法，并为进一步药效物质基础研究提供依据。

技术领域

本发明属于中药检测领域，具体的涉及到一种红景天药材的RP-HPLC指纹图谱测定方法。

背景技术

红景天为景天科大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥根和根茎。其味甘、苦，性平，归肺、心经。常用于控制高原反映，治疗神经系统疾病和消除疲劳。红景天还具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和激活磷酸酰肌醇激酶/丝氨酸激酶信号转导等多种药理的作用；红景天的化学成分较为复杂，主要为多糖类、甾醇类、鞣酸类和黄酮等，它们共同构成了红景天的药效物质基础。

目前，通常以红景天苷作为其质量控制的唯一标示性成分，然而由于中药材成分的复杂性，单一成分不足以全面反映红景天的内在质量；指纹图谱技术是从药材的整体物质基础角度出发，系统把握药材质量的一种分析技术手段；为药材质量的有效把控提供了一种可靠的质控方法。

中国专利申请号为200310112581X号的发明专利，提供了一种西藏红景天HPLC指纹图谱的构建方法，采用了与本发明不同的色谱条件和样品处理方法，标定了8个色谱峰，并未进行具体成分的指认。

申请号为201110064022.0的发明专利：大花红景天药材的质量检测方法，提供了一种红景天的HPLC指纹图谱检测方法，与本发明采用的样品处理方法、色谱条件完全不同，该方法标定了26个特征峰，由于基线和峰型的原因，无法进行具体成分的指认。

发表在西南民族大学学报的《四川阿坝州产红景天药材HPLC指纹图谱研究》一文，提供了一种红景天的HPLC指纹图谱测定方法，与本发明采用的样品处理方法和色谱条件，特别是流动相不同，标记了19个峰，但并未对其进行指认。

本发明采用HPLC法对红景天药材质量进行了研究，建立了红景天的指纹图谱，同时为提高红景天药材质量标准奠定基础，并为进一步药效物质基础研究提供依据。

发明内容

本发明的提供了一种红景天药材的HPLC指纹图谱测定方法。HPLC指纹图谱的方法学考察符合相关要求，共标定红景天药材HPLC指纹图谱的17个共有峰，指认其中红景天苷、没食子酸、咖啡酸、酪醇、对香豆酸、原儿茶酸、儿茶酸、香草醛、异槲皮苷、槲皮苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷和山奈酚12个特征峰，13批红景天药材指纹图谱的相似度在0.863~0.984。所建立的红景天HPLC指纹图谱可为红景天质量标准的建立提供依据。

本发明所述的一种红景天指纹图谱检测方法，具体包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：称定红景天粉末1-3g，精密加入75%甲醇20 mL于50mL具塞锥形瓶中，称定重量，超声提取15-30 min，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

（2）对照品溶液的制备：精密称定各对照品适量，置具塞容量瓶中，加75%甲醇溶解，超声并制成每1mL75%甲醇中含红景天苷、酪醇、儿茶素、大黄酚-8-O-葡萄糖苷对照品约0.50mg，香草醛、对香豆酸、异槲皮苷、槲皮苷、山奈酚对照品约1.00mg，没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸约1.50mg的溶液，作为对照品溶液；

（3）色谱参数： RP18色谱柱，柱温25-40°C，流速0.5-1.5mL·min-1，检测波长270-290nm，进样量8-15μL；流动相A为乙腈，B为0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱程序为0～18min，10%～24% A；18～30 min，24%～25% A；30～45 min，25%～35% A；45～55 min，35%～45% A；55～60 min，45%～55% A；60～65min，55%～95% A；65～70 min，95%～100% A；