[发明专利]一种人血红蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、血液的选取：首先从医院或医疗机构收取过期人血，然后通过称量设备量取所需体积的过期人血，备用；

S2、血浆的去除：将步骤S1量取的过期人血倒入离心设备中，然后以转速为400-500r/min，温度为25-31℃的条件下旋转离心10-20min，之后沉淀30-40min，即可完成将过期人血中的红细胞分离出来，然后采用缓冲液系统将分离出来的红细胞洗涤2-3次，能够去除血浆蛋白和部分膜磷脂；

S3、血红蛋白的释放：经过步骤S2得到堆积的血红细胞后，先把红细胞置于肾透析仪中，再倒入低渗溶液中透析1-2h，使红细胞逐断膨胀以至膜破裂，然后再将透析后的混合溶液转移至0,lμm的超滤制备中，从而过滤出血红蛋白溶液；

S4、基质的除去：将步骤S3得到的血红蛋白溶液转移至离心设备内，在10000-36000g的离心力下，离心时间为30-120min，除去红细胞膜及膜碎片基质，然后分类上清液，将所得的上清液依次过0.45和0.2pm滤膜以除去更小的基质和病菌，之后使用pH调节剂调节pH和盐离子浓度；

S5、血红蛋白的纯化：用100kd的滤膜或病毒滤器过滤，以起到脱磷脂或病毒的作用，再通过凝胶排阻层析柱对血红蛋白溶液进行分离，即可得到血红蛋白纯品。

2.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中缓冲液系统为120-130mM的NaCl、10-15mM的葡萄糖、2-3mM的MgCl₂、52-55mM的KH₂PO₄和18-20mM的K₂HPO₄组成的缓冲溶液，使用该缓冲液系统进行洗涤，能够防止红细胞的破裂和维持稳定的胞内环境。

3.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中低渗溶液为2-3mM的MgCh、5.7-6.3mM的K₂HPO₄和2.3-2.5mM的KH₂PO₄组成的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中所得的上清液是含有微量杂蛋白和脂类的血红蛋白溶液。

5.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中血红蛋白的纯化可除去99.7％以上的磷脂和99,9％以上的血型抗原。

6.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S5中凝胶排阻层析柱为WatersQMA-Acell柱，该层析柱一次能够得到20-22g血红蛋白，且需时仅为1h。

7.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的pH调节剂为0.6-1.3mol/L的碳酸钠溶液。

8.根据权利要求1所述的一种人血红蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中肾透析仪选自型号为BC2600的全自动血细胞透析仪。