[发明专利]一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒、制备方法及用途

说明书

本发明涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒、制备方法及用途。具体来说，本发明的肌酸激酶同工酶检测试剂盒中含有样品稀释液，其中，所述稀释液包括：pH7.2‑8.5的缓冲液、离子螯合剂和保护剂。本发明中最终使得肌酸激酶同工酶校准品的复溶稳定性长，保护期长，储存，运输稳定。与此同时，本发明涉及的检测试剂盒具有更优的灵敏度和特异性，在节约成本的同时，降低了抗体对于肌酸激酶同工酶的非特异性结合，提高了检测灵敏度和检测稳定性，降低了非特异性结合能够在不加入其它催化剂的前提下快速检测低浓度的肌酸激酶同工酶，可用于心肌梗死的早期诊断。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒、制备方法及用途。

背景技术

2007年10月，由欧洲心脏病学会(ESC)、美国心脏病学会(ACC)、美国心脏学会(AHA)和世界心脏联盟(WHF)全球心肌梗死的统一定义，将急性心肌梗死(AMI)定义为由于心肌缺血导致心肌细胞死亡，此定义在新版中没有变化。AMI是冠状动脉粥样硬化性心脏病的一种严重病症，发病凶险、死亡率高，治疗的最佳时间为发病后120分钟内，因此，临床快速检测对诊断和控制AMI病情颇为关键。现代医学研究表明，可以通过联合检测心肌早期标志物(MYO)、确定标志物(cTnI)和损伤标志物(CK-MB)，来提高临床对AMI诊断的早期性、快速性和正确性。肌酸激酶同工酶(Creatinekinase-MB，CK-MB)的检测可用于急性心肌梗死(AMI)的诊断和预后，心肌炎诊断和预后，肌肉疾病的诊断，脑疾病如脑梗死、脑膜炎、脑炎等疾病的诊断等。

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)旧称为肌酸磷酸激酶(Creatinephosphokinase，CPK)。CK分子量为81000，由两个亚基组成。通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。CK在ATP参与下催化肌酸磷酸化，生成ATP和磷酸肌酸。这种酶催化反应是可逆的。1979年首次发现前列腺癌患者血清中肌酸激酶的含量显著升高，此后在其他类型的癌症患者中也有相同的发现。随着研究的深入，近年来人们开始通过筛选肌酸激酶抑制剂寻找新的抗肿瘤药物。正是由于肌酸激酶具有的重要的生理功能，更加引起了人们的广泛的注意和深入的研究。

肌酸激酶同工酶(CK-MB)二聚体的每个亚基的N末端均有一个小结构域通过连接序列连接到C-末端的一个大结构域上。整个二聚体中，98％的酪氨酸残基被包裹在空间结构内部，仅有2％暴露在结构表面；另外，每个亚基表面均包含2个可以反应的组氨酸残基和2个可以反应的巯基。其复杂的空间结构给体外重组技术的应用带来了很大困难。因此重组难度高，目前市面上高品质的CK-MB均为血源型。但因来源受限价格昂贵，严重阻碍CK-MB诊断产品的研究开发。虽然国内外关于CK-MB相关的报道很多，但多数研究属于学术性研究，主要关注该蛋白酶的结构、功能；而真正关于其产品应用的研究很少。2001年，YoshikoSunahara等同时表达MB、MM、BB三种同工酶，分别纯化后按50:40:10的比例混合处理，运用蛋白动力学原理，完成MB的后期折叠，得到了CK活性较高的蛋白。但该研究就此结束，没有对该蛋白的稳定性、特异性、灵敏度及作为生物原材料的应用做任何研究。另外该研究中，MB的表达及混合比例复杂，工艺稳定性难以控制，不可能用于产品化生产。Huang Y等(2006)选择体外表达其同工酶MM，但MM或者BB同工酶的空间结构和MB迥然不同，与MB的天然结构更是相差甚远，不可能代替CK-MB作为临床检测的校准质控品。