[发明专利]一种藜麦抑制白色念珠菌蛋白的核苷酸序列及引物和方法

权利要求书

1.一种藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的PCR扩增引物，其特征在于，该PCR扩增引物，其上游引物为如SED ID NO.1所示的核苷酸序列，其下游引物为SED ID NO.2所示的核苷酸序列；或其上游引物为如SED ID NO.3所示的核苷酸序列，其下游引物为SED ID NO.4所示的核苷酸序列。

2.一种藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的核苷酸序列，其特征在于，该核苷酸序列为如SED ID NO.5所示。

3.一种藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因编码的氨基酸序列，其特征在于，该氨基酸序列为如SED ID NO.7所示。

4.一种藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因载体的构建方法，其特征在于，该方法包含：

(1)将核苷酸序列为如SED ID NO.5所示的藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因和载体进行连接反应；

(2)将步骤(1)得到的连接产物转化到CaCl₂感受态细胞中，在转化后CaCl₂感受态细胞中加入预热的LB液体培养基，混匀，于恒温摇床上震荡培养；

(3)将步骤(2)得到的重组菌种涂布于含有100μg/mL氨苄青霉素的IPTG/X-gal平板上，于恒温过夜培养，若蓝斑不明显将平板于4℃冻存；

(4)在ITPG/X-gal平板上挑选白色单菌落，将其置于含终浓度为100μg/mL氨苄青霉素的液体LB培养基中，在温度为37℃条件下振荡培养，获得含有藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的载体菌种。

5.一种含有如权利要求2所述的藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的核苷酸序列的克隆载体。

6.根据权利要求5所述的藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的核苷酸序列的克隆载体，其特征在于，该克隆载体为pET-30a+。

7.一种原核生物中表达的藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因核苷酸序列，其特征在于，该核苷酸序列为如SED ID NO.6所示。

8.一种原核生物中表达的藜麦抑制白色念珠菌蛋白基因的PCR扩增引物，其特征在于，该PCR扩增引物，其上游引物为如SED ID NO.8所示的核苷酸序列，其下游引物为SED IDNO.9所示的核苷酸序列。

9.一种原核表达体系表达藜麦抑制白色念珠菌蛋白的方法，其特征在于，该方法包含：

(1)将全基因合成的菌种进行扩大培养，提取质粒，该质粒的基因序列如SED ID NO.10所示，以该质粒为模板，采用如权利要求8中所述的PCR扩增引物，进行PCR扩增；

(2)将目的片段回收，与PET-30a+载体进行连接；

(3)将目的片段与表达载体连接之后转化大肠杆菌；

(4)对目标菌种进行扩大培养：在卡那霉素终浓度为50mg/L的LB液体培养基中过夜饱和培养，然后将菌液于加入卡那霉素浓度为50mg/L的LB液体培养基中37℃振荡培养3h，使OD₆₀₀达到0.4～0.8，加入终浓度为0.1mM的IPTG诱导蛋白表达，继续恒温振荡培养，待菌液浑浊，得到表达蛋白完成的菌液。

10.一种含有如SED ID NO.6所示核苷酸序列的菌种。