[发明专利]固载化的核酸适配体的连接臂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种固载化的核酸适配体的连接臂，其特征在于，该连接臂具有式1所示结构；

式1

其中，R1和R2各自独立地选自直链或支链的C1-C10的烷基，R为氨基保护基团，n为2-6的整数；

所述氨基保护基团为氯或氟取代的乙酰基。

2.根据权利要求1所述的连接臂，其中，R1和R2各自独立地选自直链或支链的C1-C5的烷基。

3.一种权利要求1所述的固载化的核酸适配体的连接臂的制备方法，其特征在于，该方法包括：

（1）在第一催化剂的存在下，使丙烯腈或者ω-易离去基团取代的C3-C7的腈与丙酮缩甘油进行第一接触以发生反应，得到如式2所示的第一中间产物；

式2

（2）在第二催化剂的存在下，使所述第一中间产物和还原剂发生还原反应，以将所述第一中间产物中的氰基还原为氨基，得到如式3所示的第二中间产物；

式3

（3）在惰性气体的保护下以及第一有机碱的存在下，将所述第二中间产物与能够提供氨基保护基团R的化合物进行第二接触，以使得氨基保护基团R与氨基相连从而对所述第二中间产物中的氨基进行保护，得到如式4所示的第三中间产物；

式4

（4）将所述第三中间产物与酸进行第三接触，以脱除丙酮保护基，得到第四中间产物；

（5）在取代反应的条件下，将所述第四中间产物与式5所示的化合物接触，以使所述第四中间产物取代式5所示的化合物的X基团，得到式6所述的第五中间产物；

式5               式6

（6）在第二有机碱的存在下，使所述第五中间产物与丁二酸酐发生酯化反应，得到如式7所示的第六中间产物；

式7

（7）在第三有机碱的存在下，将所述第六中间产物和氨基化的CPG接触并使得所述第六中间产物中的羧基与氨基化的CPG中的氨基进行酰胺化反应，得到式1所示的固载化的核酸适配体的连接臂；

式1，

上述式中，R1和R2各自独立地选自直链或支链的C1-C10的烷基，R为氯或氟取代的乙酰基，n为2-6的整数，ω为C3-C7的腈中与易离去基团连接的C碳原子，X为卤素。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，

步骤（1）中：

所述第一催化剂为碱性催化剂；

步骤（2）中：

所述第二催化剂为金属催化剂；

步骤（4）中：

所述酸为盐酸、三氯乙酸、三氟乙酸、乙酸和甲酸中的至少一种；

步骤（5）中：

R1和R2各自独立地选自直链或支链的C1-C5的烷基；

步骤（6）中：

所述第二有机碱为吡啶、三乙胺和4-二甲氨基吡啶中的至少一种；

步骤（7）中：

所述第三有机碱为吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶或者它们任意的混合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤（1）中所述第一催化剂为氢化钠、氢化钾、金属钠、金属钾、叔丁醇钾和二异丙胺锂中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤（1）中所述易离去基团选自溴、碘、氯、对硝基苯磺酰基和对甲基苯磺酰基中的一种。

7.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤（1）中相对于1mol的丙酮缩甘油，丙烯腈或者ω-易离去基团取代C3-C7的腈的用量为1-3mol，所述第一催化剂的用量为0.1-0.3mol。

8.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤（1）中所述第一接触的条件包括：温度为20-40℃，时间为1-3h。

9.根据权利要求4所述的方法，其中，所述金属催化剂为氯化钴、三氯化铝和氯化锌中的至少一种。

10.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤（2）中所述还原剂为硼氢化钠、硼氢化钾和四氢铝锂中的至少一种。