[发明专利]固载化的核酸适配体的连接臂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及核酸适配体技术领域，公开了固载化的核酸适配体的连接臂及其制备方法和应用。该连接臂具有式1所示结构；其中，R1和R2各自独立地选自直链或支链的C1‑C10的烷基，R为氨基保护基团，n为2‑6的整数。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：1)采用本发明提供的固载化的核酸适配体的连接臂在核酸适配体合成最后一步用浓氨水切除CPG时选择性高，只可能得到一种产物；2)所述核酸适配体连接臂上只留下一个仲醇，不易发生副反应；3)制备该固载化的核酸适配体的连接臂的原料为丙酮缩甘油，容易获得。

技术领域

本发明涉及核酸适配体技术领域，具体涉及一种固载化的核酸适配体的连接臂，一种固载化的核酸适配体的连接臂的制备方法以及由该方法制备的固载化的核酸适配体的连接臂，以及所述固载化的核酸适配体的连接臂在制备核酸适配体-药物偶合物中的应用。

背景技术

核酸适配体是一种利用自身折叠的高级结构与特定靶标结合的单链寡核苷酸，可以通过指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands byExponential Enrichment,SELEX)筛选获得。核酸适配体具有与抗体相似的亲和性和特异性，且其毒性较小，临床上应用更安全[Wochner,A.；Menger,M.；Rimmele,M.Characterisation of aptamers for therapeutic studies.Expert Opin.DrugDiscov.2007,2,1205-1224.]。并且，由于可以实现细胞水平的特异性递送，核酸适配体作为靶向分子已经被广泛应用在药物的靶向递送研究中[Jiang,F.；Liu,B.；Lu,J.；Li,F.；Li,D.；Liang,C.；Dang,L.；Liu,J.；He,B.；Badshah S.A.；Lu,C.；He,X.；Guo,B.；Zhang,X.-B.；Tan,W.；Lu,A.；Zhang,G.Progress and Challenges in Developing Aptamer-Functionalized Targeted Drug Delivery Systems.Int.J.Mol.Sci.2015,16,23784-23822.]。

核酸适配体-药物偶合物主要由三部分构成：核酸适配体、药物以及中间的连接臂[Li,F.；Lu,J.；Liu,J.；Liang,C.；Wang,M.；Wang,L.；Li,D.；Yao,H.；Zhang,Q.；Wen,J.；Zhang,Z.-K.；Li,J.；Lv,Q.；He,X.；Guo,B.；Guan,D.；Yu,Y.；Dang,L.；Wu,X.；Li,Y.；Jiang,F.；Sun,S.；Zhang,B.-T.；Lu,A.；Zhang,G.A water-soluble nucleolin aptamer-paclitaxel conjugate for tumor-specific targeting in ovariancancer.Nat.commun.2017,8,1390.]。核酸适配体-药物偶合物能否成功的关键之一在于选择合适的连接臂偶联核酸适配体和药物。王升启等提出一种固载化的核酸适配体连接臂[王升启，杨静，赵海豹，张京玉，丁晓然，鲁丹丹，刘娟，李康。一种脂肪链修饰的寡核苷酸的结构、制备方法及用途，CN201110188688.7]，其化学结构如图1所示，微球代表CPG(可控玻璃微球)。

然而，这个固载化的核酸适配体连接臂存在下列问题：1)在核酸适配体合成最后一步用浓氨水切除CPG时选择性不高，可能会得到如图2a所示的副产物；2)所得核酸适配体连接臂上保留一个伯醇，如图2b所示，这个伯羟基容易和2-位羟基磷酸酯发生酯交换反应；3)制备该连接臂的原料不易获得。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的如上问题，提供一种新的固载化的核酸适配体的连接臂，采用该固载化的核酸适配体的连接臂进行核酸适配体的合成，只会得到一种产物，如图3所示，且不易发生副反应，制备原料容易获得。

为了实现上述目的，本发明一方面提供一种固载化的核酸适配体的连接臂，该连接臂具有式1所示结构；