[发明专利]一种具有抗蛋白质吸附和适体修饰的明胶纳米粒子及其制备方法

说明书

本发明涉及生物医药材料领域，具体涉及一种具有抗蛋白质吸附和适体修饰的明胶纳米粒子及其制备方法，所述明胶纳米粒子由明胶经核酸适配体修饰表面修饰而成。本发明所提供的核酸适配体修饰的明胶纳米粒子单分散性好、稳定性和重现性均十分优良；制备方法简单易行，明胶纳米粒子具有抗蛋白质吸附性能，其表面富集丰富的羧基可以与核酸适配体偶联，既能够抗蛋白吸附，又能为核酸适配体所修饰，具有靶向性，在靶向载药治疗癌症领域具有广阔的前景。

技术领域

本发明属于生物医药材料领域，具体涉及一种具有抗蛋白质吸附和适体修饰的明胶纳米粒子及其制备方法。

背景技术

纳米药物载体是指在纳米尺寸，用来负载药物的载体，通常的药物载体可以分为无机和有机两大类。无机类的纳米药物载体多以纳米金粒子和纳米二氧化硅为核，通过化学方法在表面修饰一些药物结合位点和靶向识别位点，以达到运载药物的目的，此类纳米药物载体由于其内核不可降解，注射到人体中不易排出，具有比较大的纳米毒性。有机类的纳米药物载体通常是以自组装，乳液聚合等方法合成的，相比与无机类纳米药物载体可以在人体内被降解，生物毒性要小，但其稳定性要低于无机类纳米药物载体。处于纳米尺寸的载体能够更好的进入到细胞中。

蛋白吸附是指当纳米药物载体进入到人体血清环境中，由于纳米粒子表面所带电荷和表面能的影响，而被血清中的生物大分子所包覆，丧失其靶向识别能力，并且很快会被血清中吞噬细胞排出体外。蛋白吸附能够降低药物的释放效率，从而影响药物的靶向效率。

抗蛋白吸附是指当纳米药物载体进入到人体血清环境中，不被生物大分子所吸附，仍然具有很好的靶向识别能力的特征。第一代抗蛋白吸附的纳米载体多以聚乙二醇为代表，在纳米金颗粒或者纳米二氧化硅表面修饰一层聚乙二醇的长链，由于聚乙二醇长链具有很高的亲水性，能够在纳米粒子表面形成一层水合层，能够有效的阻止生物大分子的吸附，但此类纳米药物载体的稳定性较差，在一些高盐环境中容易发生聚集沉淀。第二代的抗蛋白吸附纳米药物载体是在纳米粒子表面修饰一层带正负离子对的结构，此类结构多以羧基甜菜碱和磺基甜菜碱为代表，使纳米粒子呈现电中性，表面的离子化官能团也能形成一层水合层，这种电中性的纳米药物载体具有较好的抗蛋白吸附能力，相比于第一代抗蛋白吸附纳米药物载体具有较好的稳定性，但其要求表面完全电中性，限制了其靶向官能团的引入，从而限制了靶向识别的能力以及药物负载的能力。

发明内容

为了克服上述技术缺陷的不足，本发明一种具有抗蛋白质吸附和适体修饰的明胶纳米粒子及其制备方法。

为了达到上述目的，一方面，提供一种具有抗蛋白质吸附和适体修饰的明胶纳米粒子的制备方法，关键在于包括以下步骤：

步骤一、制备明胶纳米粒子：将明胶、木瓜蛋白酶和水投入反应釜中，进行水解得到水解明胶，调节体系的pH值至5-6后，将复配引发剂、甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸投入反应釜中，升温进行聚合反应，制得明胶纳米粒子；

步骤二、活化明胶纳米粒子：将步骤一制得的明胶纳米粒子去除杂质后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺-磺酸(NHS-Sulfo)进行活化，得到活化的明胶纳米粒子；

步骤三、表面修饰明胶纳米粒子：将步骤二制得活化的明胶纳米粒子加入核酸适配体溶液中进行偶联，纯化后，得到核酸适配体修饰的明胶纳米粒子。

优选的，步骤一中所述复配引发剂为质量比为300：1的质量分数为20％wt双氧水和七水合硫酸亚铁。

优选的，步骤一具体为：将超纯水和明胶投入反应釜中，在体系温度60-65℃下保温30-40min，然后向反应釜中投入木瓜蛋白酶进行水解，保温水解60-70min，再调节水解体系pH值至5-6，加入七水合硫酸亚铁，并同时将体系升温至85-90℃，将质量分数为20％wt的双氧水、甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸滴加至反应体系中，进行聚合反应，得到明胶纳米粒子。