[发明专利]用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针与成套试剂

说明书

本发明公开了用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针与成套试剂。本发明公开的用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针由四甲基罗丹明荧光染料分子标记赭曲霉毒素A得到，用于检测赭曲霉毒素A的成套试剂由用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针与赭曲霉毒素A抗体组成。实验证明，利用本发明的用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针以及由其与赭曲霉毒素A抗体组成的成套试剂可以成功检测赭曲霉毒素A，对赭曲霉毒素A检测限为1‑2500nM，并可以成功从赭曲霉毒素A，赭曲霉毒素B，伏马毒素B1，伏马毒素B2，玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B1中检测到赭曲霉毒素A，检测范围宽，灵敏度高，且操作简单，检测时间短，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及分析检测领域中，用于检测赭曲霉毒素A的荧光探针与成套试剂。

背景技术

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是一种典型的真菌毒素分子，由曲霉和青霉等真菌产生的有毒化合物。赭曲霉毒素A可造成多种谷物、坚果、水果等食品的污染，污染分布广泛。赭曲霉毒素A具有肾毒性、肝毒性和免疫毒性等，而且具有致癌性，因此摄入赭曲霉毒素A污染的食品对健康造成很到的威胁。农产品和多种食品中所允许的赭曲霉毒素A的含量有很严格的限制。灵敏检测赭曲霉毒素A对于食品安全、环境保护和维护身体健康都具有重要的意义。发展快速灵敏检测赭曲霉毒素A在赭曲霉毒素A的快速筛查方面有很大需求，采用免疫抗体等的生物传感分析方法，可克服常规大型仪器监测分析方法如色谱法和质谱法等在检测时间长、检测成本高、操作复杂等局限性。荧光分析方法具有很高的灵敏度、同时操作简单、检测所需时间短，因而荧光分析方法在快速灵敏检测赭曲霉毒素A方面显示出优势。免疫抗体能选择性地与目标分子结合，是常用的亲和配体，在检测赭曲霉毒素A方面具有很广的应用，如酶联分析等，但酶联分析相对来说仍需要多个检测步骤，检测时间较长。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的荧光标记赭曲霉毒素A的荧光探针及用于检测赭曲霉毒素A的成套试剂。

本发明提供的用于检测赭曲霉毒素A的成套试剂，记为成套试剂1，所述成套试剂1由赭曲霉毒素A荧光探针和赭曲霉毒素A抗体组成；

所述赭曲霉毒素A荧光探针由四甲基罗丹明荧光染料分子标记赭曲霉毒素A得到。

所述成套试剂1中，所述赭曲霉毒素A荧光探针可按照包括如下步骤的方法制备得到：

将赭曲霉毒素A、N-羟基琥珀酰亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐与N,N-二甲基甲酰胺反应，然后加入带有氨基基团标记的四甲基罗丹明荧光染料分子衍生物进行反应,得到反应产物，从所述反应产物中分离得到所述赭曲霉毒素A荧光探针。

所述赭曲霉毒素A荧光探针的制备步骤中，赭曲霉毒素A、N-羟基琥珀酰亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐与N,N-二甲基甲酰胺的配比可为1mg：1mg：1.3mg：500μL。

带有氨基基团标记的四甲基罗丹明荧光染料分子衍生物的添加量满足带有氨基基团标记的四甲基罗丹明荧光染料分子衍生物与赭曲霉毒素A的配比可为1.3mg：1mg。

氨基基团标记的四甲基罗丹明荧光染料分子衍生物，其英文名称Tetramethylrhodamine cadaverine，Invitrogen公司。

所述从所述反应产物中分离得到所述赭曲霉毒素A荧光探针可包括利用高效液相色谱从所述反应产物中分离得到所述赭曲霉毒素A荧光探针。所述赭曲霉毒素A荧光探针可为保留时间为6.3分钟、8分钟和/或9.3分钟下的物质，三者具有相同的分子量(900.33-900.34g/mole之间)，为同分异构体。

所述成套试剂1中，所述赭曲霉毒素A抗体可为赭曲霉毒素A单克隆抗体。所述赭曲霉毒素A单克隆抗体可为OTA的的小鼠单克隆免疫抗体(Abcam公司)。