[发明专利]利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法

权利要求书

1.一种利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇8000的蛋白质样品纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)确定HMW期望值：对不含聚乙二醇8000的蛋白质对照品进行毛细管电泳检测，获取HMW期望值；如缺少不含聚乙二醇8000的蛋白质对照品，则默认HMW期望值为0；

(2)将HMW期望值和P值，代入到Minitab构建得出的模型中：

如P在2％～4％之间，则U在1mol/L～3mol/L之间，T在55℃～65℃之间，将P值带入到HMW＝-110.1+1.576T+21.1U+139.12P－0.296T×U－2.058T×P－30.75U×P+0.4502T×U×P模型；

如P在4％～8％之间，则U在1mol/L～3mol/L之间，T在60℃～70℃之间，将待测样品的P值带入到HMW＝2954－94.3T－89.1U+112.1P+0.7489T×T+1.304T×U－1.659T×P模型；

最后设定条件使T取最小值，即可通过Minitab软件得出最优U值和最优T值；

其中，P为聚乙二醇8000终浓度 ；U为尿素终浓度；T为孵育温度；

(3)向待测蛋白质样品中加入尿素和十二烷基硫酸钠，使用含有15.8-17.38mmol/L磷酸氢二钠和4.41-5.39mmol/L柠檬酸的缓冲溶液将蛋白质样品浓度调整到0.5–1.5mg/mL；十二烷基硫酸钠浓度调整到质量百分浓度0.64％-0.78％；尿素终浓度调整到模型计算得出的终浓度U，并加入适量N-乙基马来酰亚胺；

(4)将蛋白质样品在依据模型计算得出的孵育温度T下加热5～20分钟充分变性以备进样；

(5)毛细管电泳实验：先将凝胶缓冲液加入毛细管中，将蛋白质样品进样，分离，检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白质样品为单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，缓冲溶液含有15.8mmol/L磷酸氢二钠和4.9mmol/L柠檬酸。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，蛋白质样品中十二烷基硫酸钠浓度调整到0.71％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在进样分析前需将蛋白质样品的浓度调整到1mg/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，在孵育温度T下加热10分钟充分变性。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，毛细管电泳分析时采用的毛细管为总长度30.2cm，有效长度20.2cm，内径50μm的非涂层毛细管。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，使用SCIEX PA 800Plus毛细管电泳仪进行所述电泳。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，凝胶缓冲液为SCIEX公司的SDS-MW凝胶缓冲液。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，凝胶缓冲液加入条件为：70.0psi，10.0min。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，蛋白质样品进样条件为：5.0kV，20.0s。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，电泳时毛细管温度为25℃；分离电压为15.0kV；分离时间为35min。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(5)中，采用二极管阵列检测器进行检测，检测波长为220nm。