[发明专利]利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法

说明书

本发明公开一种利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法，该方法包括：(1)对蛋白质样品加入尿素及相关试剂进行前处理；(2)使用合适的温度对样品进行孵育；(3)进行毛细管电泳分析；(4)根据不同成分的峰面积比计算蛋白质样品的纯度。其中尿素终浓度和孵育温度均由模型确定。本发明通过加入尿素和优化孵育温度的方法解决了传统毛细管电泳测定该类药物纯度时峰型变形、难以准确定量等问题，保证了纯度测定的准确性和精密性。

技术领域

本发明涉及生物分离分析领域，特别是涉及一种利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法。

背景技术

在蛋白质样品生产开发中，不同工艺体系会产生较多工艺相关的添加剂，其来源于生产工艺的各个环节，比如在下游纯化工艺和药物处方开发过程中为了提高不同分子量蛋白质片段的分辨率和维持蛋白质分子的稳定而加入的聚乙二醇。但这些添加剂的引入可能会在样品前处理、仪器进样分析等阶段对蛋白质样品纯度的检测产生影响，从而无法得到真实和准确的纯度检测结果。所以，为了保证蛋白质样品的关键质量属性被准确检测，对于不同工艺开发体系的蛋白质药品，都应建立对应的纯度分析方法。

毛细管电泳法是蛋白质类药物纯度分析最常用的方法之一，该方法通过在样品中加入过量的十二烷基硫酸钠，促使其中所有蛋白质分子带有相同的荷质比，并将带有相同荷质比的蛋白质分子引入到充满具有分离作用的凝胶的毛细管中，通过在毛细管两端施加电压，完成样品中不同分子量蛋白质成分的分离。目前我们在试验中发现蛋白质样品处方中的聚乙二醇对毛细管电泳纯度检测的影响十分显著。当使用毛细管电泳仪检测含有一定浓度聚乙二醇的蛋白质样品时，检测结果谱图中会出现无法被其他技术手段证实的聚集体峰，从而影响蛋白质样品纯度的准确分析。目前，还没有针对聚乙二醇对毛细管电泳检测产生影响的报道和解决办法，本发明的目的在于解决了此问题。

对于蓬勃发展的生物制药行业，不同工艺开发体系的涌现势必会带来更多影响纯度分析的因素，但目前还没有适用于不同工艺开发体系的毛细管电泳分析方法的报道，国内大部分的生物药物生产商很少有独立对这方面的方法进行优化的经验与技术，所以相关性质的工作是很有必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法，该方法能够克服聚乙二醇的干扰，准确的检测出处方中蛋白质样品组分的纯度。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种利用毛细管电泳技术检测含聚乙二醇的蛋白质样品纯度的方法，包括以下步骤：

(1)确定HMW期望值：对不含聚乙二醇8000的蛋白质对照品进行毛细管电泳检测，获取HMW期望值；如缺少不含聚乙二醇8000的蛋白质对照品，则默认HMW期望值为0；

(2)将HMW期望值和P值，代入到Minitab构建得出的模型中：

如P在2％～4％之间，则U在1mol/L～3mol/L之间，T在55℃～65℃之间，将P值带入到HMW＝-110.1+1.576T+21.1U+139.12P－0.296T×U－2.058T×P－30.75U×P+0.4502T×U×P模型；

如P在4％～8％之间，则U在1mol/L～3mol/L之间，T在60℃～70℃之间，将待测样品的P值带入到HMW＝2954－94.3T－89.1U+112.1P+0.7489T×T+1.304T×U－1.659T×P模型；

最后设定条件使T取最小值，即可通过Minitab软件得出尿素终浓度U和孵育温度T；