[发明专利]一种促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法

权利要求书

1.一种促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、肌腱干细胞培养液的制备：在DMEM培养基中加入重量份的血清10-20％、青霉素100U/mL、链霉素100U/mL；

S2、肌腱干细胞的制备：在无菌条件下将跟腱组织块洗涤并剪碎成块状结构，随后置于消化液中完全浸没1-2h，然后在添加肌腱干细胞培养液，获得混合液A；

S3、初代肌腱干细胞获得：将S2获得的混合液A进行离心处理，获得上清液，并将上清液进行过滤处理，即为初代肌腱干细胞；

S4、肌腱干细胞培养：将初代肌腱干细胞以2×10⁵个/mL接种于承装有肌腱干细胞培养液的培养板中进行细胞培养，随后进行传代培养，获得传代肌腱干细胞；

S5、肌腱干细胞获得：将传代肌腱干细胞清洗后加入消化液浸泡15min，随后进行离心处理，获得上清液，获得肌腱干细胞。

2.根据权利要求1所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S2中腱组织块采用0.1mol/L磷酸缓冲溶液后，再使用生理盐水清洗，随后剪切成1-2mm的块状。

3.根据权利要求1所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S2中消化液由胶原酶和0.1％胰酶液按照重量份组成1:1混合。

4.根据权利要求1所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S3中混合液A获得的通过50μm无菌尼龙过滤网过滤，获得最终的肌腱干细胞。

5.根据权利要求1所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S4中肌腱干细胞培养的环境：37℃、5％CO₂空气的条件下培养2-3天，进行传代培养。

6.根据权利要求1所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S4中细胞培养过程，先进行原代培养24-30h第一次换液，之后每隔36h换培养液一次，直至换4-5次，将培养的的肌腱干细胞以5000-8000个/cm²接种于培养瓶中进行传代培养。

7.根据权利要求6所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述传代培养为三次。

8.根据权利要求7所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S3、S5中离心处理时的转速控制在3000-3200rpm。

9.根据权利要求7所述的促进创伤再生修复的细胞因子制剂的制备方法，其特征在于，所述S5中获得的肌腱干细胞于4-5℃恒温保存。