[发明专利]100bp DNA分子量标准物的制备方法、引物组及其应用有效
| 申请号： | 201911107232.6 | 申请日： | 2019-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN110714053B | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 傅向阳 | 申请（专利权）人： | 生工生物工程（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 201600 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 100 bp dna 分子量 标准 制备 方法 引物 及其 应用 | ||
1.一种100bp DNA分子量标准物的制备方法，其特征在于，包括使用第一引物、第二引物和搭桥引物，经PCR扩增得到所述100bp DNA分子量标准物；
所述第一引物为如SEQ ID NO.1所示序列；
所述第二引物为如SEQ ID NO.2所示序列；
所述搭桥引物为SEQ ID NO.3所示序列，所述PCR扩增得到的产物的长度为100bp。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述100bp DNA分子量标准物的序列为SEQ ID NO.4所示序列。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，PCR反应中，使用的DNA聚合酶包括高保真DNA聚合酶。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶包括Pfu DNA聚合酶和/或KOD DNA聚合酶。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶包括Pfu DNA聚合酶。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，PCR反应中使用Taqplus酶，所述Taqplus酶包括Taq酶和Pfu DNA聚合酶。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶总酶活当量的10～30％。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶总酶活当量的15～25％。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶总酶活当量的20％。
10.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，PCR反应的退火温度为55～60℃。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，PCR反应的退火温度为57～59℃。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，PCR反应的退火温度为58℃。
13.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，第一引物、第二引物和搭桥引物的摩尔比为(3～5)：(3～5)：0.1。
14.引物组，其特征在于，包括：第一引物、第二引物和搭桥引物；所述第一引物为SEQID NO.1所示序列；所述第二引物为SEQ ID NO.2所示序列；所述搭桥引物为SEQ ID NO.3所示序列，所述第一引物、所述第二引物和所述搭桥引物经PCR扩增得到的产物的长度为100bp。
15.试剂或试剂盒，其特征在于，包括权利要求14所述的引物组。
16.根据权利要求15所述的试剂或试剂盒，其特征在于，第一引物、第二引物和搭桥引物的摩尔比为(3～5)：(3～5)：0.1。
17.权利要求1-13任一项所述的制备方法，权利要求14所述的引物组或权利要求15或16所述的试剂盒在制备DNA Marker中的应用。
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