[发明专利]100bp DNA分子量标准物的制备方法、引物组及其应用

说明书

本发明提供了一种100bp DNA分子量标准物的制备方法、引物组及其应用，涉及生物技术领域。该制备方法包括使用第一引物、第二引物和搭桥引物，经PCR扩增得到100bp DNA分子量标准物；第一引物为如SEQ ID NO.1所示序列，或为和SEQ ID NO.1所示序列90％以上同源性的序列；第二引物为如SEQ ID NO.2所示序列，或为和SEQ ID NO.2所示序列90％以上同源性的序列；搭桥引物的3’端含有与第一引物的3’端10～15bp的反向碱基互补序列；搭桥引物的5’端含有与第二引物的3’端10～15bp的重复序列；PCR扩增产物的长度为100bp。该制备方法操作简单，经济高效。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种100bp DNA分子量标准物的制备方法、引物组及其应用。

背景技术

脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)是一类大分子物质，通常作为遗传信息的载体，对DNA的研究在生命科学研究中占据重要的地位。

电泳是常用于核酸检测的方法。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在琼脂糖凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就提供了很好的分辨能力。鉴于琼脂糖凝胶电泳的特性，其常被用于DNA的检测。

在电泳实验时，常用已知分子量大小的DNA样品作为参照物，以帮助实验人员迅速判断检测DNA分子量的大小，这些已知分子量大小的DNA就是DNA分子量标准物。通常将分子量大小不同的DNA片段混合起来作为标准参照物，以方便实验检测。这些混合好的DNA分子量标准物常被叫做DNA Marker，除向生物技术公司购买外，实验室也可以根据需要自行配制。

目前常用的DNA Marker有两种，一种是质粒或病毒DNA经过酶切获得的，片段的分子量大小有零有整，如Lambda DNA经限制性内切酶EcoR I酶切得到6条带，其大小分别为21226bp、7421bp、5804bp、5643bp、4878bp和3530bp，Lambda DNA经限制性内切酶Hind III酶切则得到另外大小不同的8条带；另外一种是固定数值的，比如100bp、200bp、500bp、1000bp、2000bp、10000bp等，它通常是先制备固定分子量的DNA分子量标准物，然后再混合而成，通过选择不同的DNA分子量标准物混合得到不同的DNA marker产品。这后一种DNAmarker产品更方便用于对比观察，因而更常用。

配制DNA marker产品，首先需要制备固定分子量的DNA分子量标准物。目前主要采用两种方法，一种是常规PCR扩增，即采用模板(常用的模板为质粒，因其容易制备)和引物，PCR反应扩增出固定分子量的DNA分子量标准物如500bp、1000bp、2000bp等片段；另一种是酶切法，即先构建合适的质粒，提取质粒后再通过限制性内切酶酶切，得到固定分子量的DNA分子量标准物。比如，构建好一个3000bp的质粒，通过对质粒上单一的限制性酶切位点切割得到3000bp的DNA分子量标准物，也可以在质粒上设计多个位点，酶切后得到多个DNA分子量标准物，采用这种方法后续的纯化步骤会比较复杂。

但对于小分子量的DNA分子量标准物如100bp DNA片段的制备，上述两种方法均不理想。质粒的自身结构决定了其至少有1000bp以上长度，能酶切出100bp大小片段的质粒即便构建出来，后续的制备工艺也很复杂；常规PCR扩增方法倒是简单，但实验中发现，小片段扩增效率低，用常规PCR法来制备100bp DNA片段并不经济。因而，寻找一种简单、高效且经济的100bp DNA分子量标准物的制备方法显得十分必要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种100bp DNA分子量标准物的制备方法，该制备方法操作简单，经济高效。

本发明的第二目的在于提供一组引物组，该引物组经PCR反应能够合成100bp DNA分子。