[发明专利]一种大豆SSR标记高通量多重PCR的方法

权利要求书

1.一种大豆SSR标记高通量多重PCR的引物组，其特征在于，包括引物对1～引物对10；

引物对1:

F:5’-AGTTAGGGTGATCAGAAAACTGTAA，如SEQ ID NO.1所示；

R:5’-GATTGCTCCAACGTATTAAGCACTT，如SEQ ID NO.2所示；

引物对2:

F:5’-TGAAACCTGGAAAAAGATACGTGTG，如SEQ ID NO.3所示；

R:5’-GTTGAAGGAAATGCTTCAAACCAAC，如SEQ ID NO.4所示；

引物对3:

F:5’-AGTTGGTGTTTTCTTGTGGTTTTCT，如SEQ ID NO.5所示；

R:5’-CGTACTCTGTACTGGGAGCTAATTA，如SEQ ID NO.6所示；

引物对4:

F:5’-TTTATGACTCTTTGCAGCAAGAAGG，如SEQ ID NO.7所示；

R:5’-AATGATCTAATGTGTGACCATGCAC，如SEQ ID NO.8所示；；

引物对5:

F:5’-TGCTTCCCTATGCAAAAAGATTGAG，如SEQ ID NO.9所示；

R:5’-TCAAGTATGGTGGAAAACTTGAAGC，如SEQ ID NO.10所示；

引物对6:

F:5’-TCACCTATTTTCAAATTATGCGCTCA，如SEQ ID NO.11所示；

R:5’-ATGGAAATACTGAATGAAAGCATATTG，如SEQ ID NO.12所示；

引物对7:

F:5’-TCACGAAAGTTTTTCTGTAACATCT，如SEQ ID NO.13所示；

R:5’-GCCTGTATATAAAGGTGCACAAAGT，如SEQ ID NO.14所示；

引物对8:

F:5’-GCTTACATGCAACCTATAAGGCATT，如SEQ ID NO.15所示；

R:5’-AGGTTGTCAAATGATGAGAAGTCTT，如SEQ ID NO.16所示；

引物对9:

F:5’-TGGTGACACTGTATACCAAACTCTT，如SEQ ID NO.17所示；

R:5’-GGACTCTGCCTCGTAATATTACCAT，如SEQ ID NO.18所示；

和引物对10:

F:5’-TTCTTGAGAATTACTGTGTCCCTGT，如SEQ ID NO.19所示；

R:5’-CCTGATGGGATGCACTTTGTATATT，如SEQ ID NO.20所示。

2.根据权利要求1所述的一种大豆SSR标记高通量多重PCR的引物组，其特征在于，引物的5’端标记有荧光报告基团，所述引物对1～3荧光报告基团为FAM，所述引物对4～6荧光报告基团为HEX，所述引物对7荧光报告基团为TAMRA，所述引物对8～10荧光报告基团为ROX。

3.一种大豆SSR标记高通量多重PCR的方法，其特征在于，建立荧光多重PCR体系，利用权利要求1所述的引物组对大豆DNA进行多重PCR扩增，电泳分析。

4.根据权利要求3所述一种大豆SSR标记高通量多重PCR的方法，其特征在于，所述多重PCR的扩增体系为：总体积25μL，每条引物0.4μM，混合引物共1.5μL，20ng/μL的DNA5μL，Premix Ex Taq Hot Start酶12.5μL、水6μL。

5.根据权利要求3所述一种大豆SSR标记高通量多重PCR的方法，其特征在于，所述多重PCR的扩增程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，60℃退火4min，32个循环；72℃延伸5min。

6.一种包含权利要求1所述的大豆SSR标记高通量多重PCR的引物组的检测试剂盒，其特征在于，还包括Premix Ex Taq Hot Start酶和水。

7.一种如权利要求1所述的大豆SSR标记高通量多重PCR的引物组在检测试剂盒、指纹图谱构建和品种鉴别中的应用。