[发明专利]基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型构建方法及其应用

权利要求书

1.基因过表达嵌合动物模型构建方法，包括，

构建的Synapsin为启动子驱动hAgRP慢病毒表达载体；

将所述载体注射到猕猴的室旁核中；

所述hAgRP转录到所述室旁核细胞基因中，实现hAgRP基因的过表达，诱导表型产生，形成基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型。

2.如权利要求1所述的动物模型构建方法，其特征在于，所述载体为Lenti-hsyn-AgRP-2A-mcherry。

3.如权利要求2所述的动物模型构建方法，其特征在于，所述载体中的AgRP为hAgRP；进一步地，所述载体包括WPRE为转录增强元件。

4.如权利要求3所述的动物模型构建方法，其特征在于，所述载体为HA-标记hAgRP慢病毒表达载体。

5.如权利要求1所述的动物模型构建方法，其特征在于，在注射到猕猴前，将所述载体注射进小鼠大脑去检测表达效率。

6.如权利要求5所述的动物模型构建方法，其特征在于，所述小鼠注射载体3-6周后，获得小鼠大脑的冰冻切片，如果显示出显示高水平表达的hAgRP，则所述载体可用于猕猴的注射。

7.如权利要求1所述的动物模型构建方法，其特征在于，包括，

载体构建，构建的Synapsin为启动子驱动hAgRP慢病毒表达载体；

动物甄选，选择1-2岁龄猕猴，优选为1岁龄雄性猕猴；

载体导入，采用核磁共振辅助下的微注射方式，将载体注射到猕猴室旁核中；

动物护养，对注射了所述载体的猕猴进行护养；

基因过表达转录，所述hAgRP转录到所述室旁核细胞基因中，实现hAgRP基因的过表达，诱导表型产生；

动物模型性状检验，对所述猕猴的性状进行检测，如果表型符合性状要求，形成基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型。

8.如权利要求7所述的动物模型构建方法，其特征在于，所述注射的载体颗粒数量远大于所述室旁核细胞数量；进一步地，所述载体的载体颗粒浓度为10⁹个/µl，注射2µl。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体Lenti-hsyn-hAgRP-2A-mcherry的序列为序列表中的SEQ ID NO.1序列。

10.如权利要求1-9任一项所述的动物模型构建方法用于肥胖/神经系统疾病的致病机理研究；和/或，

用于糖尿病等疾病的致病机理研究；和/或，

用于肥胖/神经系统疾病的临床治疗手段研究；和/或，

用于糖尿病等疾病的临床治疗手段研究；和/或，

用于肥胖/神经系统疾病治疗药物的筛选、验证、试验及临床前的相关研究；和/或，

用于糖尿病等疾病治疗药物的验证、试验及临床前的相关研究。