[发明专利]基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型构建方法及其应用

说明书

本发明公开了基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型构建方法及其应用，述方法包括构建的Synapsin为启动子驱动hAgRP慢病毒表达载体；将所述载体注射到猕猴的室旁核中；所述hAGRP转录到所述室旁核细胞基因中，实现hAgRP基因的过表达，诱导表型产生，形成基于hAgRP的基因过表达嵌合动物模型。所述方法可用于用于相关疾病的致病机理研究、临床治疗手段研究治疗药物的筛选、验证、试验及临床前的相关研究等。本发明具有动物模型的构建周期短、效率高、成本低、表型外显率高、同步性好、可重复性高、难度小，便于规模化应用等特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及动物模型的构建技术，尤其涉及利用转基因技术在体细胞中实现的动物模型构建方法及其应用。

背景技术

动物疾病模型（动物模型）主要是实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究的重要工具。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。

人类疾病的动物模型(animal model of human disease)是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。发明人在完成本发明过程中发现，目前动物模型的建立方式主要采用：

药物诱导构建相应的动物模型，如中国专利申请2014100899525建立高血尿酸动物模型及应用，公开了建立非人灵长类动物高血尿酸模型的方法，包括以下步骤：选择血尿酸水平正常:尿酸水平在1.54±1.05umol/L的健康成年恒河猴作为模型动物；选择包括乙胺丁醇和尿酸的药物组合物作为造模药物；灌胃给药，具体给药量为乙胺丁醇：10-50mg/kg和尿酸：20-50mg/kg，造模后可自由进食，饮水，每天给药一次，连续给药3天以上，获得非人灵长类动物高血尿酸模型。发明人在完成本发明过程中发现，该方法由于通过大量药物强制灌输给用于建立模型的动物，导致形成的动物模型因体内的药物，导致后期动物模型的应用范围受限，甚至无法广泛应用。

以及，采用基因工程构建相应的动物模型，如美国专利申请US10/179639公开了开发动物模型的方法，以建立具有相同的基因型、表型、演出型和遗传背景的多个突变动物种，其包含如下步骤：在性不成熟突变起始动物(G0)中诱导超数排卵；使超数排卵的性不成熟突变起始动物受精；通过完成妊娠过程得到第一代突变动物(F1)；在第一代突变动物中确认突变的稳定性，基因型、表型、演出型、及遗传背景的同一性；且如果需要，用突变动物的一或多代后代重复上述步骤至少20代，其中在每步骤中监视所有动物的遗传和环境因素并严格保证其相同，其中每一代中突变的稳定性以及基因型、表型、演出型、及遗传背景的同一性都受到环境因素的计划的遗传监视及抽查；和，其中只有在通过计划的遗传监视及抽查证实了在每一代的突变体中突变是稳定的，而且所述突变体的基因型、表型、演出型、及遗传背景与突变起始动物的基因型、表型、演出型、及遗传背景是同一的时候，才使所述突变体受精。发明人在完成本发明过程中发现，该技术方案周期长，成本高，适应面窄，而且成功率相对较低，不便于大规模的应用。