[发明专利]绿盲蝽在不同因子下稳定表达的内参基因及其应用有效

专利信息
申请号: 201911110000.6 申请日: 2019-11-14
公开(公告)号: CN112795660B 公开(公告)日: 2022-05-10
发明(设计)人: 罗静;王奥丽;成艳霞;郭丽彬;徐乐天 申请(专利权)人: 湖北大学
主分类号: C12Q1/6888 分类号: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司: 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 代理人: 丁齐旭
地址: 430076 湖北*** 国省代码: 湖北;42
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摘要:
搜索关键词: 绿盲蝽 不同 因子 稳定 表达 内参 基因 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种绿盲蝽在不同因子下稳定表达的内参基因组合,其特征在于,

绿盲蝽虫在不同发育阶段中稳定表达的内参基因组合为RPL27RPL32

绿盲蝽虫在不同组织中稳定表达的内参基因组合为RPL27RPL32

绿盲蝽虫在dsRNA处理条件下稳定表达的内参基因组合为RPL27EF1γ

其中RPL27的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,RPL32的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,EF1γ的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

所述的RPL27作为稳定内参基因用于实时荧光定量PCR分析时所使用的引物序列为:正:GGGGTCACGTGAGTCATGGT 反:GTCTGTTCGGTGACGAGGGT ;

所述的RPL32作为稳定内参基因用于荧光定量分析时所使用的引物序列为:

正:CAAGCTCACGAGGAATTGGCG,反:GAGGACTTTCCTGAAGCCGGT;

所述的EF1γ作为稳定内参基因用于荧光定量分析时所使用的引物序列为:

正:GCCGCACTTACCTCGTCAAC,反:CCTTGTTGTTCCGCCTTGGG。

2.一种绿盲蝽在不同因子下稳定表达的内参基因组合的筛选方法,其特征在于步骤为:

1)、用生物克隆技术从绿盲蝽全虫的总RNA中提取EF1γ、RPL32、 RPL27SDHTBPACT2GAPDH、βTUBACT 9个候选内参基因,并通过RT-PCR技术进行序列验证;

2)对9个内参基因在不同因子条件下稳定表达进行实时荧光定量PCR分析筛选;

3)确定绿盲蝽在不同因子下稳定表达的内参基因组合为:

绿盲蝽虫在不同发育阶段中稳定表达的内参基因组合为RPL27RPL32

绿盲蝽虫在不同组织中稳定表达的内参基因组合为RPL27RPL32

绿盲蝽虫在dsRNA处理条件下稳定表达的内参基因组合为RPL27EF1γ

其中RPL27为核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,RPL32为核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示,EF1γ为核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

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