[发明专利]以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法

权利要求书

1.以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：包括以下阶段：阶段一：研究对象选择和分组依据；

阶段二：样本制作；

阶段二包括以下步骤：

步骤1：血清蛋白的沉淀，取0.5mL血清样本，加入0.5mL饱和硫酸铵，涡旋震荡30s以上，溶液温度4℃，离心转速16000rpm，离心15min后，另取一只EP管，转移离心后的上层清液；

步骤2：固相萃取，首先，取活化小柱，向小柱中加入3mL甲醇，待自然流尽后，再加入3mL超纯水，待自然流尽，备用，然后上样，将步骤1中EP管上层清液溶液全部转移至已活化的小柱中，控制流速，自然流尽，进一步的除杂，样本自然流尽后，小柱中加入1mL超纯水，自然流尽后，用真空泵-20psi抽干15min，除去萃取柱中残留的水相，最后样本收集用15mL离心管替换废液收集管，小柱中加入4mL洗脱液，待自然流尽后，再加入4mL正己烷，待自然流尽，用真空泵-20psi抽10min，此时待测物已收集至该离心管；

步骤3：浓缩，首先将收集的样品溶液氮吹浓缩，氮吹至近干，氮吹近干后，加入200µL二氯甲烷溶液，涡旋震荡1min，涡旋后全转移至装有200µL内插管的棕色样本瓶中，待液体自然挥干，加入20µL乙酸乙酯溶液复溶，待测；

阶段三：样本上机，GC-MS开机之后抽真空等其稳定，上机检测；

阶段四：数据分析。

2.根据权利要求1所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：所述步骤2中所用到的试剂和耗材包括下列试剂：

试剂A：饱和硫酸铵溶液

试剂B：色谱级甲醇

试剂C：超纯水

试剂D：洗脱液

试剂E：色谱级正己烷

试剂F：色谱级二氯甲烷

试剂G：色谱级乙酸乙酯

试剂H：二甲戊灵试剂

C18小柱。

3.根据权利要求1所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：阶段三:仪器GC使用高纯氦气作为载气，流速1mL/min。

4.根据权利要求1所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：阶段三仪器MS质谱端仪器:碰撞气为高纯氩气，流速1mL/min。

5.根据权利要求1所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：阶段三进样方式：自动进样，进样时间21分钟，进样针3次以上。

6.根据权利要求2所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：试剂D中包含比例为8:2色谱级二氯甲烷和甲醇。

7.根据权利要求2所述的以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，其特征在于：试剂H：二甲戊灵试剂浓度分别为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50ug/L。