[发明专利]以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法

说明书

本发明属于分析化学及临床医学领域，具体为以非诊断为目的基于GC‑MS精子计数的检测方法，包括：阶段一：研究对象选择和分组依据；阶段二：样本制作；阶段三：样本上机和阶段四：数据分析，本发明目的：1.建立基于GC‑MS的血清中二甲戊灵暴露的检测方法；2.将二甲戊灵暴露作为精子计数降低的效应标志物进行应用；3.开发用于血清中的二甲戊灵暴露检测的诊断试剂盒，本发明提供的血清中二甲戊灵暴露检测可在早期通过微创方式预测精子计数降低的风险，相较于精液采集更为省时方便，可对育龄男性的精子计数进行早期筛查，为临床医生进一步深入检查提供依据。

技术领域

本发明属于分析化学及临床医学领域，具体为以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法。

背景技术

国家人口和计划生育委员会科学技术研究所在对1981年到1996年间共一万多人的精子进行分析后发现，我国男性的精液质量正以每年1%的速度下降，降幅达40%以上。截至2017年，上海精子库的捐精合格率仅为25%，而湖北省人类精子库2011年-2017年的分析数据同样发现捐精合格率不到30%。捐精合格率的下降，一定程度上反应出整体人群的精子水平在下降。有研究发现1973年至2011年间，北美、欧洲、澳大利亚和新西兰的男性精子数量显著下降，且生育率下降了50-60%。根据世界卫生组织对近10年的评估数据，中国男性与三四十年前相比，每毫升精液所含精子数目从1亿个左右，大幅降至目前的2000万至4000万个。精子计数与受孕有着密切的关联，精子计数降低时，生育机会将会减少。引起精子计数降低可能的原因包括：年龄、吸烟或饮酒、不良生活方式、环境因素等，其中环境化学物暴露由于重视度不足和检测技术的限制，较容易被临床所忽略。

我国是农药使用大国，生产和使用量均居世界第一。目前，二甲戊灵是世界第3大除草剂，凭借其广谱，高效的优良品质，成为了销量最大的选择性除草剂。二甲戊灵主要用于棉花、玉米、水稻、马铃薯、大豆、花生、烟草以及蔬菜田的除草。已有研究表明，农药暴露对男性精液质量有不利影响，可能导致精子计数减少，活力下降，形态异常等。而大部分研究对农药暴露的评估大多以问卷形式等进行，未进行体内检测，无法具体到农药暴露的种类及浓度。因此二甲戊灵暴露对于男性生殖健康的影响目前还未明确。

GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）因其分离效率高、定量分析简便，灵敏度高、定性能力强等优点，已广泛应用于环境及人体内的农残检测。采用GC-MS分析男性血清中二甲戊灵暴露水平在精子计数中的应用还未得到相应的关注。若能发现二甲戊灵暴露作为精子计数降低的效应标志物，并研发相应的GC-MS检测方法，提高检测结果的稳定性、准确性及灵敏度，可对育龄男性的精子计数进行早期筛查评估，进一步促进和提高我国男性生殖健康水平。

发明内容

本发明的目的是：1.建立基于GC-MS的血清中二甲戊灵暴露的检测方法；2.将二甲戊灵暴露作为精子计数降低的效应标志物进行应用；3.开发用于血清中的二甲戊灵暴露检测的诊断试剂盒。

为了解决上述技术问题，以非诊断为目的基于GC-MS精子计数的检测方法，包括以下阶段：

阶段一：研究对象选择和分组依据；

阶段二：样本制作；

阶段二包括以下步骤：

步骤1：血清蛋白的沉淀，取0.5mL血清样本，加入0.5mL饱和硫酸铵，涡旋震荡30s以上，溶液温度4℃，离心转速16000rpm，离心15min后，另取一只EP管，转移离心后的上层清液；