[发明专利]一种测定核酸适配体亲和力的通用方法

权利要求书

1.一种测定核酸适配体亲和力的通用方法，其特征在于，该方法基于吸附质的带电状态显著影响纳米金聚集程度的现象：带正电或接近电中性的靶标由于静电吸引或憎水相互作用，非特异性吸附在带负电的纳米金的表面，显著降低纳米金之间的电荷排斥作用，从而引起纳米金的快速聚集；靶标-核酸适配体复合物具有比靶标更多的负电荷，因而复合物在纳米金上非特异性吸附后没有显著降低纳米金的负电量，因此纳米金聚集程度较小或不发生聚集，由此利用纳米金的颜色变化或粒径变化进行核酸适配体亲和力定量测定；

该方法包括如下步骤：

步骤一：合成所述纳米金的pH值为6.5；

步骤二：一定量的蛋白质或小分子与其核酸适配体或没有亲和力DNA序列在结合缓冲液中混合孵育一段时间形成混合物；

步骤三：将具有所需pH值的纳米金加入所述混合物中，在室温下孵育一段时间；其中所需pH值使蛋白质或小分子带有正电或接近中性，由于静电吸引或憎水相互作用，非特异性吸附在带负电的纳米金的表面，显著降低纳米金之间的电荷排斥作用，从而引起纳米金的快速聚集；具有低于pH值6.5的纳米金通过加入适量盐酸来制备；

步骤四：观察颜色变化或者进行紫外-可见光谱测定或者进行动态光散射粒径测量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米金直径为13nm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米金利用柠檬酸还原法进行合成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中，分别将不同浓度的核酸适配体与其对应的蛋白质靶标混合孵育，然后加入纳米金，随后进行DLS粒径测定，根据粒径增长数据，绘制结合曲线，其中纵坐标为结合百分比，根据结合曲线，经非线性拟合得到K_D，结合百分率BP由以下公式计算：BP＝(Δd₀-Δd_n)/(Δd₀-Δd_∞)，式中，Δd₀，Δd_n和Δd_∞分别是不含核酸适配体的粒径增加值，加入一定浓度的核酸适配体时的粒径增加值，以及当结合达到平衡时的粒径增加值。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法用于蛋白质核酸适配体的筛选、蛋白质核酸适配体K_D的测定、用于SELEX筛选出来的候选核酸适配体的筛选、用于候选核酸适配体的结合位点研究和用于小分子核酸适配体的筛选。