[发明专利]一种快速增殖神经干细胞培养基在审
| 申请号： | 201911111619.9 | 申请日： | 2019-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN110684735A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 张鹏成 | 申请（专利权）人： | 安徽科门生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 11357 北京同辉知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 王依 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市高新区潜水*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非必需氨基酸 神经干细胞 抗生素 碱性成纤维细胞生长因子 表皮细胞生长因子 细胞培养添加剂 牛血清白蛋白 营养物质吸收 毒素影响 分类过程 胶原蛋白 快速增殖 细胞分化 纤连蛋白 营养物质 转铁蛋白 培养基 基材 分裂 | ||
1.一种快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，包括以下组成：以DMEM/F12培养基为基材，表皮细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、转铁蛋白的含量为10～15μg/mL、碱性成纤维细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、纤连蛋白的含量为15～25ng/mL、四型胶原蛋白组的含量为50～70ng/mL、抗生素的含量为0.05～0.13mg/mL、牛血清白蛋白的含量为40～60μg/mL、非必需氨基酸的含量为8～10μmol/mL以及B27细胞培养添加剂。
2.根据权利要求1所述的快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，所述抗生素由含量为90～110U/mL青霉素、0.05～0.13mg/mL链霉素、200～300ng/mL两性霉素混合而成。
3.根据权利要求1所述的快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸为谷氨酸、酪氨酸、脯氨酸、甘氨酸、胱氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸或丝氨酸的其中一种或混合。
4.根据权利要求1所述的快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，所述B27细胞培养添加剂的体积含量占DMEM/F12培养基的2～3％。
5.根据权利要求1-4任一项所述的快速增殖神经干细胞培养基的使用方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
于35～39℃温度环境下、空气CO2含量3～8％下，将神经干细胞培养基置于无菌环境下，随后将神经干细胞贴壁培养，每2～3d更换培养基，待神经干细胞细胞达到90％融合度后消化，按1:4比例传代。
6.根据权利要求5所述的快速增殖神经干细胞培养基的使用方法，其特征在于，所述培养的神经干细胞密度为5×104～1×105/mL。
7.根据权利要求5所述的快速增殖神经干细胞培养基的使用方法，其特征在于，所述接种密度为2-5×104/cm2。
8.根据权利要求5所述的快速增殖神经干细胞培养基的使用方法，其特征在于，所述培养基新添加的量为原培养基量的2/3。
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